Jeden z nejdůležitějších problémů v oblasti zdraví žen rizika a přínosy substituční léčby estrogenem. Neustálá nejistota a nedostatek konsensu ohledně substituční léčby estrogeny vedly mnoho žen k hledání alternativních zdrojů estrogenu, včetně bylinných přípravků. Upravili jsme biologickou zkoušku z rekombinantních buněk k měření bioaktivity estrogenu v bylinách. Studovali jsme in vitro bioaktivitu estrogenu u jetele červeného, dong quai, černého rasce, sóji, lékořice, cudných bobulí, fo-ti a chmele. Sója, jetel, lékořice a chmel mají velké množství měřitelné estrogenové bioaktivity, jak se předpokládá, na základě předchozích zpráv využívajících jiné metody. Zjistili jsme překvapivě vysokou aktivitu estrogenu v extraktech fo-ti, které nebyly dříve popsány. Cudná bobule, černá cohosh a dong quai neměli s touto metodou měřitelnou aktivitu. Zjistili jsme také, že odstranění glykonové skupiny ze sóji významně zvyšuje její bioaktivitu estrogenu. Dospěli jsme k závěru, že tento biologický test na rekombinantní buňky pro estradiol lze použít k měření bioaktivity v rostlinných produktech. Studované přípravky fo-ti měly estrogenovou aktivitu 409 ± 55 pmol / litr ekvivalentů estradiolu na mikrogram byliny, což je 1/300 aktivity 17β-estradiolu. Probíhají klinické studie ke stanovení biologické aktivity estrogenu u žen užívajících doplňky stravy obsahující tyto byliny.

Jedna z nejdůležitějších otázek zdraví žen se týká rizik a přínosů estrogenové substituční terapie . Neustálá nejistota a nedostatek konsensu o standardní estrogenové substituční terapii však vedly mnoho žen k hledání alternativních zdrojů estrogenu, včetně bylinných přípravků (1). V dostupných přípravcích se používá několik bylin, z nichž nejběžnější jsou: jetel červený, dong quai, cohosh, sója, lékořice a cudné bobule stromu. Přes značnou historii bylin používaných k jejich účinkům podobným estrogenu se teprve nedávno objevily zprávy o měření estrogenní aktivity u některých z těchto bylin (2–9). Kromě toho nebylo provedeno mnoho kontrolovaných studií o účinku těchto přípravků na ženy. Stále neexistuje shoda ohledně použití, dávkování nebo dlouhodobé bezpečnosti těchto doplňků.

Dříve jsme demonstrovali použití biologického testu na rekombinantní buňky pro estradiol k posouzení velmi nízkých hladin estradiolu. v séru dětí a postmenopauzálních žen (10–16). Tento test měří aktivitu estrogenu vazbou estrogenového receptoru (ER) a v kvasinkovém systému transformovaném plazmidem kódujícím prvky estrogenové odpovědi a plazmidem kódujícím ERα (17). Pomocí adaptace této metodiky jsme se pokusili posoudit bioaktivitu estrogenu v následujících bylinách: jetel červený (Trifolium pretense L.), dong quai (Angelica sinensis), koš (Cimicifuga racemosa), sója, lékořice (Glycyrrhiza glabra) ), bobule cudného stromu (Vitex agnus-castus L.), fo-ti (Polygonum multiflorum) a chmel (Humulus lupulus L.).

Materiály a metody

Bylinná extrakce

Cizí bobule, černá cohosh, červená jetel, dong quai, fo-ti, lékořice, chmel, sója a sójový aglykon (SoyA) byly analyzovány na aktivitu estrogenu následujícím způsobem. Sušené bylinné extrakty byly získány z Natural Alternative International (San Marcos, CA) před smícháním do kapslí doplňku výživy. K extrakci bylo použito šedesát miligramů každé byliny, s výjimkou sóji a SoyA, pro které byly použity 3 mg. Všechny bylinky byly extrahovány 2 ml methanolu, kromě lékořice, která byla extrahována 2 ml etheru. Byliny a rozpouštědlo se 2 minuty vířily a 10 minut centrifugovaly při 3000 otáčkách za minutu. Supernatant byl odstraněn a přefiltrován přes 0,45 um skleněný injekční filtr a uložen pro použití při teplotě místnosti.

Estrogenový test

Biologický test na estradiol byl popsán dříve podrobně (17). Aktivita estrogenu je definována vazbou ER v geneticky upraveném kvasinkovém systému. Stručně řečeno, používá kmen Saccharomyces cerevisiae, který je transformován dvěma plazmidy. Jeden plazmid obsahuje lidskou ER komplementární DNA a druhý obsahuje estrogenový odezvový prvek před kvasinkovým promotorem iso-1-cytochromu C fúzovaným se strukturním genem pro β-galaktosidázu. Transformované kvasinky se pěstují v selektivním médiu v přítomnosti bylinného extraktu. Aktivita β-galaktosidázy se testuje a převádí na jednotky ekvivalentní estradiolu lineární interpolací ze standardní křivky vytvořené přidáním známého množství estradiolu do média pro analýzu. Citlivost biotestu byla v průběhu studie 0,02–2 pg / ml (0,07–7 pmol / litr).

Statistiky

Každý bylinný extrakt byl analyzován v triplikátu a opakován ve třech po sobě jdoucích testech. Ekvivalenty estradiolu byly vypočteny interpolací ze standardní křivky vytvořené v testovacím médiu se známými množstvími 17p-estradiolu. (Obr. 1). Výsledky jsou proto vyjádřeny v ekvivalentech estradiolu v pikomolech na litr na mikrogram suchého bylinného extraktu. Všechna data jsou vyjádřena jako průměr ± sd. Porovnání mezi skupinami byla provedena pomocí vícerozměrné ANOVA s post hoc korekcí (nejmenší statistický rozdíl). Rozdíly byly považovány za významné při P < 0,05.

Výsledky

Měřitelný estrogenní aktivita byla prokázána u jetele červeného, fo-ti, chmele, sóji a lékořice, zatímco žádná nebyla nalezena u cudných bobulí, černých košů nebo dong quai (tabulka 1). Jak je znázorněno na obr. 2, bylo zjištěno, že z těch bylin se zjistitelnou aktivitou estrogenu obsahuje aglykosylovaná sója (SoyA) nejvyšší množství ekvivalentů estradiolu ve srovnání s ostatními, včetně sóji. Značná bioaktivita estrogenu byla také identifikována u jetele červeného a fo-ti. Lékořice a chmel měly významně nižší aktivitu estrogenu než fo-ti. Detekce aktivity estrogenu ve fo-ti nebyla dříve popsána.