Uno dei problemi più importanti nei problemi di salute delle donne i rischi e i benefici della terapia sostitutiva con estrogeni. La continua incertezza e mancanza di consenso riguardo alla terapia sostitutiva con estrogeni ha spinto molte donne a cercare fonti alternative di estrogeni, compresi i rimedi erboristici. Abbiamo adattato un test biologico delle cellule ricombinanti per misurare la bioattività degli estrogeni nelle erbe. Abbiamo studiato, in vitro, la bioattività degli estrogeni nel trifoglio rosso, nel dong quai, nel cohosh nero, nella soia, nella liquirizia, nella bacca del casto, nel fo-ti e nel luppolo. Soia, trifoglio, liquirizia e luppolo hanno una grande quantità di bioattività misurabile degli estrogeni, come sospettato, sulla base di precedenti rapporti utilizzando altri metodi. Abbiamo scoperto un’attività estrogenica sorprendentemente elevata in estratti di fo-ti non riportati in precedenza. Chaste tree berry, black cohosh e dong quai non hanno avuto un’attività misurabile con questo metodo. Abbiamo anche scoperto che la rimozione di un gruppo glicone dalla soia aumenta significativamente la sua bioattività estrogenica. Concludiamo che questo saggio biologico delle cellule ricombinanti per l’estradiolo può essere utilizzato per misurare la bioattività nei prodotti a base di erbe. Le preparazioni di fo-ti studiate avevano un’attività estrogenica di 409 ± 55 pmol / litro di estradiolo equivalenti per microgrammo di erba, che è 1/300 dell’attività del 17β-estradiolo. Sono in corso studi clinici per determinare la bioattività degli estrogeni nelle donne che utilizzano integratori alimentari contenenti queste erbe.

UNA DELLE questioni più importanti per la salute delle donne riguarda i rischi ei benefici della terapia sostitutiva con estrogeni . Tuttavia, la continua incertezza e la mancanza di consenso sulla terapia sostitutiva con estrogeni standard ha spinto molte donne a cercare fonti alternative di estrogeni, compresi i rimedi erboristici (1). Ci sono diverse erbe utilizzate nelle preparazioni disponibili, di cui le più comuni includono: trifoglio rosso, dong quai, cohosh, soia, liquirizia e bacche di casto. Nonostante una considerevole storia di erbe utilizzate per i loro effetti simili agli estrogeni, solo di recente sono stati riportati casi di misurazione dell’attività estrogenica in alcune di queste erbe (2-9). Inoltre, non sono stati condotti molti studi controllati sull’effetto di questi preparati nelle donne. Non rimane consenso sull’uso, il dosaggio o la sicurezza a lungo termine di questi integratori.

In precedenza, abbiamo dimostrato l’uso di un saggio biologico di cellule ricombinanti per l’estradiolo per valutare i livelli molto bassi di estradiolo nel siero dei bambini e delle donne in postmenopausa (10-16). Questo test misura l’attività degli estrogeni attraverso il legame del recettore degli estrogeni (ER) α in un sistema di lievito trasformato con un plasmide che codifica gli elementi di risposta dell’estrogeno e un plasmide che codifica per ERα (17). Utilizzando un adattamento di questa metodologia, abbiamo tentato di valutare la bioattività degli estrogeni nelle seguenti erbe: trifoglio rosso (Trifolium pretense L.), dong quai (Angelica sinensis), cohosh nero (Cimicifuga racemosa), soia, liquirizia (Glycyrrhiza glabra ), bacche di casto (Vitex agnus-castus L.), fo-ti (Polygonum multiflorum) e luppolo (Humulus lupulus L.).

Materiali e metodi

Estrazione di erbe

La bacca del casto, il cohosh nero, il trifoglio rosso, il dong quai, il fo-ti, la liquirizia, il luppolo, la soia e l’aglicone di soia (SoyA) sono stati analizzati per l’attività degli estrogeni come segue. Gli estratti di erbe essiccate sono stati ottenuti da Natural Alternative International (San Marcos, CA) prima di essere aggiunti in capsule di integratori alimentari. Per l’estrazione sono stati utilizzati 60 milligrammi di ciascuna pianta, ad eccezione della soia e della soia, per le quali sono stati utilizzati 3 mg. Tutte le erbe sono state estratte con 2 ml di metanolo, ad eccezione della liquirizia, che è stata estratta con 2 ml di etere. L’erba e il solvente sono stati agitati su vortex per 2 minuti e centrifugati a 3000 rpm per 10 minuti. Il surnatante è stato rimosso e filtrato attraverso un filtro per siringa di vetro da 0,45 μm e conservato a temperatura ambiente per l’uso.

Test degli estrogeni

Il test biologico per l’estradiolo è stato descritto in precedenza in dettaglio (17). L’attività degli estrogeni è definita dal legame di ER in un sistema di lievito geneticamente modificato. In breve, utilizza un ceppo di Saccharomyces cerevisiae che viene trasformato con due plasmidi. Un plasmide contiene il DNA complementare ER umano e l’altro contiene un elemento di risposta estrogenica a monte del promotore dell’iso-1-citocromo C del lievito fuso al gene strutturale per la β-galattosidasi. Il lievito trasformato viene coltivato in terreni selettivi in presenza di estratto di erbe. L’attività della β-galattosidasi viene analizzata e convertita in unità equivalenti di estradiolo mediante interpolazione lineare da una curva standard costruita aggiungendo quantità note di estradiolo ai terreni di analisi. La sensibilità del saggio biologico è stata di 0,02-2 pg / ml (0,07-7 pmol / litro) durante il periodo dello studio.

Statistiche

Ogni estratto di erbe è stato analizzato in triplicato e ripetuto per tre analisi consecutive. Gli equivalenti di estradiolo sono stati calcolati mediante interpolazione da una curva standard costruita in terreni di analisi con quantità note di 17β-estradiolo. (Fig. 1). Pertanto, i risultati sono espressi in equivalenti di estradiolo in picomoli per litro per microgrammo di estratto secco di erbe. Tutti i dati sono espressi come media ± sd. I confronti tra i gruppi sono stati effettuati utilizzando un’ANOVA multivariata con correzione post hoc (differenza statistica minima). Le differenze sono state considerate significative a P < 0,05.

Risultati

Estrogenici misurabili l’attività è stata dimostrata nel trifoglio rosso, nel fo-ti, nel luppolo, nella soia e nella liquirizia, mentre nessuno è stato trovato nella bacca dell’albero del casto, nel cohosh nero o nel dong quai (Tabella 1). Come mostrato in Fig. 2, tra quelle erbe con attività estrogenica rilevabile, si è trovato che la soia aglicosilata (SoyA) contiene la più alta quantità di equivalenti di estradiolo, rispetto alle altre, inclusa la soia. Una considerevole bioattività degli estrogeni è stata identificata anche nel trifoglio rosso e nel fo-ti. Liquirizia e luppolo avevano un’attività estrogenica significativamente inferiore rispetto a fo-ti. La rilevazione dell’attività estrogenica in fo-ti non è stata segnalata in precedenza.