Lady Macbeth är en av Shakespeares mest kända och skrämmande kvinnliga karaktärer. När vi först ser henne planerar hon redan Duncans mord, och hon är starkare, mer hänsynslös och mer ambitiös än sin man. Hon verkar vara helt medveten om detta och vet att hon måste driva Macbeth till att begå mord. Vid ett tillfälle önskade hon att hon inte skulle vara kvinna så att hon kunde göra det själv. Temat för förhållandet mellan kön och makt är nyckeln till LadyMacbeths karaktär: hennes man antyder att hon är en manlig man som bor i en kvinnlig kropp, vilket verkar koppla maskulinitet till ambition och våld. Shakespeare verkar emellertid använda henne, och häxorna, för att underskatta Macbeths idé att ”oförskämd stil bör komponera / ingenting annat än män” (1.7.73–74). Dessa listiga kvinnor använder kvinnliga metoder för att uppnå kraft – det vill säga manipulation – för att främja deras påstådda manliga ambitioner. Kvinnor, pjäsen antyder, kan vara lika ambitiösa och grymma som män, men sociala begränsningar förnekar dem möjligheten att driva dessa ambitioner till sina egna.

Lady Macbeth manipulerar sin man med anmärkningsvärd effektivitet, övervägande alla hans invändningar, när han tvekar att mörda, ifrågasätter sherepeatly hans manlighet tills han känner att han måste begå mord för att bevisa sig själv. Lady Macbeths anmärkningsvärda styrka av viljepersoner genom mordet på kungen – det är hon som stöder sin mans nerver omedelbart efter att brottet har Efteråt börjar hon emellertid en långsam glida in i galenskap – precis som ambitionen påverkar henne starkare än Macbeth före brottet, så plågar skuld henne starkare efteråt. I slutet av pjäsen har hon minskat till sömnpromenader genom slottet och försöker desperat tvätta bort en osynlig blodfläck. När väl skuldkänslan kommer hem för att bli ro, blir Lady Macbeths känslighet en svaghet, och hon klarar inte av. Det är betydelsefullt att hon (uppenbarligen) dödar sig själv och signalerar hennes totala oförmåga att hantera arvet från deras brott.