Uma das questões mais importantes nas questões de saúde das mulheres os riscos e benefícios da terapia de reposição de estrogênio. A incerteza contínua e a falta de consenso em relação à terapia de reposição de estrogênio levaram muitas mulheres a buscar fontes alternativas de estrogênio, incluindo remédios à base de ervas. Adaptamos um bioensaio de células recombinantes para medir a bioatividade do estrogênio em ervas. Estudamos, in vitro, a bioatividade do estrogênio em trevo vermelho, dong quai, cohosh preto, soja, alcaçuz, baga da árvore casta, fo-ti e lúpulo. Soja, trevo, alcaçuz e lúpulo têm uma grande quantidade de bioatividade estrogênica mensurável, como suspeito, com base em relatórios anteriores usando outros métodos. Descobrimos atividade estrogênica surpreendentemente alta em extratos de fo-ti não relatados anteriormente. A baga da árvore casta, o cohosh preto e o dong quai não tiveram atividade mensurável com este método. Também descobrimos que a remoção de um grupo glicona da soja aumenta significativamente a bioatividade do estrogênio. Concluímos que este bioensaio de células recombinantes para estradiol pode ser usado para medir a bioatividade em produtos fitoterápicos. As preparações de fo-ti estudadas apresentaram atividade estrogênica de 409 ± 55 pmol / litro de estradiol equivalentes por micrograma de erva, que é 1/300 da atividade do 17β-estradiol. Estudos clínicos estão em andamento para determinar a bioatividade do estrogênio em mulheres que usam suplementos dietéticos contendo essas ervas.

UMA DAS questões mais importantes na saúde das mulheres diz respeito aos riscos e benefícios da terapia de reposição de estrogênio . No entanto, a incerteza contínua e a falta de consenso sobre a terapia de reposição de estrogênio padrão tem levado muitas mulheres a buscar fontes alternativas de estrogênio, incluindo remédios fitoterápicos (1). Existem várias ervas usadas nas preparações disponíveis, das quais as mais comuns incluem: trevo vermelho, dong quai, cohosh, soja, alcaçuz e baga de árvore casta. Apesar da história considerável de ervas usadas por seus efeitos semelhantes ao estrogênio, apenas recentemente houve relatos de medição da atividade estrogênica em algumas dessas ervas (2–9). Além disso, não houve muitos estudos controlados sobre o efeito dessas preparações em mulheres. Ainda não há consenso sobre o uso, a dosagem ou a segurança a longo prazo desses suplementos.

Anteriormente, demonstramos o uso de um bioensaio de células recombinantes para estradiol para avaliar os níveis muito baixos de estradiol no soro de crianças e mulheres na pós-menopausa (10–16). Este ensaio mede a atividade do estrogênio por meio da ligação do receptor de estrogênio (ER) α em um sistema de levedura transformado com um plasmídeo que codifica os elementos de resposta do estrogênio e um plasmídeo que codifica o ERα (17). Usando uma adaptação desta metodologia, tentamos avaliar a bioatividade do estrogênio nas seguintes ervas: trevo vermelho (Trifolium pretense L.), dong quai (Angelica sinensis), cohosh preto (Cimicifuga racemosa), soja, alcaçuz (Glycyrrhiza glabra ), baga de árvore casta (Vitex agnus-castus L.), fo-ti (Polygonum multiflorum) e lúpulo (Humulus lupulus L.).

Materiais e métodos

Extração de ervas

Baga da árvore casta, cohosh preto, trevo vermelho, dong quai, fo-ti, alcaçuz, lúpulo, soja e aglicona de soja (SoyA) foram analisados quanto à atividade de estrogênio como segue. Extratos de ervas secas foram obtidos da Natural Alternative International (San Marcos, CA) antes de compor cápsulas de suplementos dietéticos. Sessenta miligramas de cada erva foram usados para extração, com exceção da soja e da soja, para as quais foram usados 3 mg. Todas as ervas foram extraídas com 2 ml de metanol, exceto o alcaçuz, que foi extraído com 2 ml de éter. Erva e solvente foram agitados em vórtex por 2 min e centrifugados a 3000 rpm por 10 min. O sobrenadante foi removido e filtrado através de um filtro de seringa de vidro de 0,45 μm e armazenado em temperatura ambiente para uso.

Ensaio de estrogênio

O bioensaio para estradiol foi descrito anteriormente em detalhes (17). A atividade do estrogênio é definida pela ligação ao ER em um sistema de levedura geneticamente modificado. Resumidamente, ele usa uma cepa de Saccharomyces cerevisiae que é transformada com dois plasmídeos. Um plasmídeo contém o DNA complementar de ER humano e o outro contém um elemento de resposta de estrogênio a montante do promotor iso-1-citocromo C de levedura fundido ao gene estrutural para β-galactosidase. A levedura transformada é cultivada em meio seletivo na presença de extrato de erva. A atividade de β-galactosidase é testada e convertida em unidades equivalentes de estradiol por interpolação linear de uma curva padrão construída pela adição de quantidades conhecidas de estradiol ao meio de ensaio. A sensibilidade do bioensaio foi de 0,02–2 pg / ml (0,07–7 pmol / litro) durante o tempo do estudo.

Estatísticas

Cada extrato de erva foi analisado em triplicata e repetido em três ensaios consecutivos. Equivalentes de estradiol foram calculados por interpolação de uma curva padrão construída em meio de ensaio com quantidades conhecidas de 17β-estradiol. (Figura 1). Portanto, os resultados são expressos em equivalentes de estradiol em picomoles por litro por micrograma de extrato de erva seca. Todos os dados são expressos como a média ± dp. As comparações entre os grupos foram feitas usando uma ANOVA multivariada com correção post hoc (menor diferença estatística). As diferenças foram consideradas significativas em P < 0,05.

Resultados

Estrogênico mensurável a atividade foi demonstrada em trevo vermelho, fo-ti, lúpulo, soja e alcaçuz, ao passo que nenhuma foi encontrada na baga da árvore casta, cohosh preto ou dong quai (Tabela 1). Conforme mostrado na Fig. 2, entre aquelas ervas com atividade de estrogênio detectável, a soja aglicosilada (SoyA) foi encontrada para conter a maior quantidade de equivalentes de estradiol, em comparação com as outras, incluindo soja. Considerável bioatividade de estrogênio também foi identificada no trevo vermelho e fo-ti. Alcaçuz e lúpulo tiveram atividade estrogênica significativamente menor do que fo-ti. A detecção da atividade estrogênica em fo-ti não foi relatada anteriormente.