Jedna z najważniejszych kwestii dotyczących zdrowia kobiet ryzyko i korzyści związane z zastępczą terapią estrogenową. Ciągła niepewność i brak zgody co do zastępczej terapii estrogenowej skłoniły wiele kobiet do poszukiwania alternatywnych źródeł estrogenu, w tym preparatów ziołowych. Zaadaptowaliśmy test biologiczny na rekombinowanych komórkach do pomiaru bioaktywności estrogenu w ziołach. Badaliśmy bioaktywność estrogenu in vitro u koniczyny czerwonej, dong quai, cohos czarnego, soi, lukrecji, czystych jagód drzewiastych, fo-ti i chmielu. Soja, koniczyna, lukrecja i chmiel mają dużą ilość mierzalnej bioaktywności estrogenu, jak podejrzewano na podstawie wcześniejszych doniesień wykorzystujących inne metody. Odkryliśmy zaskakująco wysoką aktywność estrogenu w ekstraktach fo-ti, o których wcześniej nie donoszono. Czysta jagoda drzewna, czarny cohosh i dong quai nie wykazały mierzalnej aktywności w przypadku tej metody. Odkryliśmy również, że usunięcie grupy glikonów z soi znacznie zwiększa jej bioaktywność estrogenu. Doszliśmy do wniosku, że ten test biologiczny rekombinowanych komórek na estradiol może być stosowany do pomiaru bioaktywności w produktach ziołowych. Aktywność estrogenów badanych preparatów fo-ti wynosiła 409 ± 55 pmol / litr równoważnika estradiolu na mikrogram ziela, co stanowi 1/300 aktywności 17β-estradiolu. Trwają badania kliniczne mające na celu określenie bioaktywności estrogenu u kobiet stosujących suplementy diety zawierające te zioła.

JEDNA Z NAJWAŻNIEJSZYCH kwestii dotyczących zdrowia kobiet dotyczy zagrożeń i korzyści wynikających z zastępczej terapii estrogenowej . Jednak ciągła niepewność i brak konsensusu co do standardowej estrogenowej terapii zastępczej skłoniły wiele kobiet do poszukiwania alternatywnych źródeł estrogenu, w tym leków ziołowych (1). W dostępnych preparatach wykorzystanych jest kilka ziół, z których najczęstsze to: koniczyna czerwona, dong quai, cohosh, soja, lukrecja i czysta jagoda drzewna. Pomimo długiej historii stosowania ziół ze względu na ich działanie podobne do estrogenów, dopiero niedawno pojawiły się doniesienia o pomiarach aktywności estrogenowej niektórych z tych ziół (2–9). Ponadto nie przeprowadzono wielu kontrolowanych badań wpływu tych preparatów na kobiety. Nie ma zgody co do stosowania, dawkowania lub długoterminowego bezpieczeństwa tych suplementów.

Wcześniej wykazaliśmy zastosowanie testu biologicznego rekombinowanych komórek dla estradiolu w celu oceny bardzo niskich poziomów estradiolu w surowicy dzieci i kobiet po menopauzie (10–16). Test ten mierzy aktywność estrogenu poprzez wiązanie receptora estrogenowego (ER) α w układzie drożdży transformowanym plazmidem kodującym elementy odpowiedzi estrogenowej i plazmidem kodującym ERα (17). Wykorzystując adaptację tej metodyki, podjęliśmy próbę oceny bioaktywności estrogenu w następujących ziołach: koniczyna czerwona (Trifolium pretense L.), dong quai (Angelica sinensis), kohos czarny (Cimicifuga racemosa), soja, lukrecja (Glycyrrhiza glabra) ), jagody z czystego drzewa (Vitex agnus-castus L.), fo-ti (Polygonum multiflorum) i chmiel (Humulus lupulus L.).

Materiały i metody

Ekstrakcja ziół

Jagody z czystego drzewa, cohosh czarny, koniczyna czerwona, dong quai, fo-ti, lukrecja, chmiel, soja i aglikon sojowy (SojaA) analizowano pod kątem aktywności estrogenu w następujący sposób. Suszone ekstrakty z ziół uzyskano z Natural Alternative International (San Marcos, CA) przed zmieszaniem w kapsułki suplementu diety. Do ekstrakcji użyto sześćdziesiąt miligramów każdego zioła, z wyjątkiem soi i soi A, dla których użyto 3 mg. Wszystkie zioła ekstrahowano 2 ml metanolu, z wyjątkiem lukrecji, którą ekstrahowano 2 ml eteru. Zioło i rozpuszczalnik były worteksowane przez 2 minuty i wirowane przy 3000 obrotach na minutę przez 10 minut. Supernatant usunięto i przefiltrowano przez szklany filtr strzykawkowy 0,45 μm i przechowywano w temperaturze pokojowej do użycia.

Test estrogenu

Test biologiczny na estradiol został szczegółowo opisany wcześniej (17). Aktywność estrogenu jest definiowana przez wiązanie ER w genetycznie zmodyfikowanym systemie drożdży. W skrócie, wykorzystuje szczep Saccharomyces cerevisiae, który jest transformowany dwoma plazmidami. Jeden plazmid zawiera komplementarne DNA ludzkiego ER, a drugi zawiera element odpowiedzi estrogenowej w górę od promotora izo-1-cytochromu C drożdży połączonego z genem strukturalnym β-galaktozydazy. Transformowane drożdże hoduje się w pożywkach selektywnych w obecności ekstraktu ziołowego. Aktywność β-galaktozydazy jest oznaczana i przekształcana do jednostek równoważnych estradiolu przez liniową interpolację z krzywej standardowej skonstruowanej przez dodanie znanych ilości estradiolu do pożywki testowej. Czułość testu biologicznego w czasie trwania badania wynosiła 0,02–2 pg / ml (0,07–7 pmol / litr).

Statystyka

Każdy wyciąg z ziół został przeanalizowany w trzech powtórzeniach i powtórzony w trzech kolejnych testach. Równoważniki estradiolu obliczono przez interpolację z krzywej standardowej skonstruowanej w pożywce testowej ze znanymi ilościami 17β-estradiolu. (Rys. 1). Dlatego wyniki są wyrażone w równoważnikach estradiolu w pikomolach na litr na mikrogram suchego ekstraktu z ziół. Wszystkie dane wyrażono jako średnią ± odchylenie standardowe. Porównań między grupami dokonano przy użyciu wielowymiarowej analizy ANOVA z korektą post hoc (najmniejsza różnica statystyczna). Różnice uznano za istotne przy P < 0,05.

Wyniki

Mierzalny poziom estrogenów aktywność została wykazana w koniczynie czerwonej, fo-ti, chmielu, soi i lukrecji, natomiast żadnej nie stwierdzono w jagodach czystych, czarnych kohosach czy dong quai (tab. 1). Jak pokazano na ryc. 2, spośród ziół o wykrywalnej aktywności estrogenu stwierdzono, że aglikozylowana soja (SoyA) zawiera największą ilość równoważników estradiolu w porównaniu z innymi, w tym soją. Znaczną bioaktywność estrogenu stwierdzono również u koniczyny czerwonej i fo-ti. Lukrecja i chmiel miały znacznie niższą aktywność estrogenową niż fo-ti. Wykrycie aktywności estrogenu w fo-ti nie zostało wcześniej opisane.