En av de viktigste problemene i kvinners helseproblemer risikoen og fordelene med østrogenerstatningsterapi. Kontinuerlig usikkerhet og mangel på konsensus om østrogenerstatningsterapi har fått mange kvinner til å søke alternative kilder til østrogen, inkludert urtemedisiner. Vi tilpasset en rekombinant cellebioanalyse for å måle østrogenbioaktivitet i urter. Vi studerte, in vitro, østrogenbioaktivitet i rødkløver, dong quai, svart cohosh, soya, lakris, kysk trebær, fo-ti og humle. Soya, kløver, lakris og humle har en stor mengde målbar østrogenbioaktivitet, som mistenkt, basert på tidligere rapporter med andre metoder. Vi oppdaget overraskende høy østrogenaktivitet i ekstrakter av fo-ti som ikke tidligere er rapportert. Kysk trebær, svart cohosh og dong quai hadde ikke målbar aktivitet med denne metoden. Vi oppdaget også at fjerning av en glykongruppe fra soya øker østrogenbioaktiviteten betydelig. Vi konkluderer med at denne rekombinante cellebioanalysen for østradiol kan brukes til å måle bioaktivitet i urteprodukter. Preparatene av studert fo-ti hadde østrogenaktivitet på 409 ± 55 pmol / liter østradiolekvivalenter per mikrogram urt, som er 1/300 aktiviteten til 17β-østradiol. Kliniske studier pågår for å bestemme østrogenbioaktiviteten hos kvinner som bruker kosttilskudd som inneholder disse urtene. . Imidlertid har kontinuerlig usikkerhet og mangel på konsensus om standard østrogenerstatningsterapi fått mange kvinner til å søke alternative kilder til østrogen, inkludert urtemedisiner (1). Det er flere urter som brukes i tilgjengelige preparater, hvorav de vanligste inkluderer: rødkløver, dong quai, cohosh, soya, lakris og kysk trebær. Til tross for betydelig historie med urter brukt for østrogenlignende effekter, har det nylig blitt rapportert om måling av østrogen aktivitet i noen av disse urtene (2–9). I tillegg har det ikke vært mange kontrollerte studier av effekten av disse preparatene hos kvinner. Det er fortsatt ikke enighet om bruken, doseringen eller den langsiktige sikkerheten til disse tilskuddene.

Tidligere har vi demonstrert bruken av en rekombinant cellebioanalyse for østradiol for å vurdere de svært lave nivåene av østradiol. i serum hos barn og postmenopausale kvinner (10–16). Denne analysen måler østrogenaktivitet gjennom binding av østrogenreseptor (ER) α i et gjærsystem transformert med et plasmid som koder østrogenresponselementer og et plasmid som koder for ERα (17). Ved å bruke en tilpasning av denne metoden har vi forsøkt å vurdere bioaktiviteten til østrogen i følgende urter: rødkløver (Trifolium pretense L.), dong quai (Angelica sinensis), svart cohosh (Cimicifuga racemosa), soya, lakris (Glycyrrhiza glabra) ), kysk trebær (Vitex agnus-castus L.), fo-ti (Polygonum multiflorum) og humle (Humulus lupulus L.).

Materialer og metoder

Utekstraksjon

Kysk trebær, sort cohosh, rødkløver, dong quai, fo-ti, lakris, humle, soya og soyaglykon (SoyA) ble analysert for østrogenaktivitet som følger. Tørkede urteekstrakter ble oppnådd fra Natural Alternative International (San Marcos, CA) før de ble blandet i kosttilskuddskapsler. Seksti milligram av hver urt ble brukt til ekstraksjon, med unntak av soya og SoyA, som det ble brukt 3 mg til. Alle urter ble ekstrahert med 2 ml metanol, bortsett fra lakris, som ble ekstrahert med 2 ml eter. Urter og løsemiddel ble vortexblandet i 2 minutter og sentrifugert ved 3000 rpm i 10 min. Supernatanten ble fjernet og filtrert gjennom et 0,45 um glassprøytefilter og lagret ved romtemperatur for bruk.

Østrogenanalyse

Bioanalysen for østradiol ble beskrevet tidligere i detalj (17). Østrogenaktivitet er definert av ER-binding i et genetisk konstruert gjærsystem. Kortfattet bruker den en stamme av Saccharomyces cerevisiae som transformeres med to plasmider. Det ene plasmidet inneholder humant ER-komplementært DNA, og det andre inneholder et østrogenresponselement oppstrøms gjæriso-1-cytokrom C-promotoren fusjonert til strukturgenet for β-galaktosidase. Den transformerte gjæren dyrkes i selektive medier i nærvær av urtekstrakt. β-galaktosidaseaktivitet analyseres og omdannes til estradiol ekvivalente enheter ved lineær interpolasjon fra en standardkurve konstruert ved tilsetning av kjente mengder østradiol til analysemedier. Følsomheten til bioanalysen var 0,02–2 pg / ml (0,07–7 pmol / liter) i løpet av studietiden.

Statistikk

Hvert urtekstrakt ble analysert i tre eksemplarer og gjentatt over tre påfølgende analyser. Østradiol-ekvivalenter ble beregnet ved interpolasjon fra en standardkurve konstruert i analysemedier med kjente mengder 17β-østradiol. (Figur 1). Derfor blir resultatene uttrykt i østradiolekvivalenter i pikomoler per liter per mikrogram tørt urtekstrakt. Alle data er uttrykt som gjennomsnitt ± sd. Sammenligning mellom grupper ble gjort ved hjelp av en multivariat ANOVA med post hoc-korreksjon (minst statistisk forskjell). Forskjeller ble ansett som signifikante ved P < 0,05.

Resultater

Målbar østrogen aktivitet ble demonstrert i rødkløver, fo-ti, humle, soya og lakris, mens ingen ble funnet i kysk trebær, svart cohosh eller dong quai (tabell 1). Som vist i figur 2, blant de urter med påvisbar østrogenaktivitet, ble aglykosylert soya (SoyA) funnet å inneholde den høyeste mengden østradiolekvivalenter, sammenlignet med de andre, inkludert soya. Betydelig østrogenbioaktivitet ble også identifisert i rødkløver og fo-ti. Lakris og humle hadde betydelig lavere østrogenaktivitet enn fo-ti. Påvisning av østrogenaktivitet i fo-ti er ikke rapportert tidligere.