Az egyik legfontosabb kérdés a nők egészségügyi problémáiban az ösztrogénpótló kezelés kockázatai és előnyei. Az ösztrogénpótló terápiával kapcsolatos folyamatos bizonytalanság és a konszenzus hiánya sok nőt arra késztetett, hogy alternatív ösztrogénforrásokat keressen, beleértve a gyógynövényeket is. Rekombináns sejtbiológiai vizsgálatot alkalmaztunk az ösztrogén bioaktivitás mérésére a gyógynövényekben. In vitro tanulmányoztuk az ösztrogén bioaktivitást vörös lóhere, dong quai, fekete cohosh, szója, édesgyökér, tiszta fa bogyó, fo-ti és komló esetében. A szója, a lóhere, az édesgyökér és a komló nagy valószínűséggel mérhető ösztrogén bioaktivitással rendelkezik, a korábbi, más módszereket alkalmazó jelentések alapján. Meglepően magas ösztrogén aktivitást fedeztünk fel a fo-ti kivonataiban, amelyekről korábban nem számoltak be. A tiszta fa bogyó, a fekete cohosh és a dong quai nem gyakorolt mérhető aktivitást ezzel a módszerrel. Azt is felfedeztük, hogy a glikoncsoport eltávolítása a szójából jelentősen növeli az ösztrogén bioaktivitását. Megállapítottuk, hogy az ösztradiol rekombináns sejtbiológiai vizsgálata felhasználható a növényi termékek bioaktivitásának mérésére. A vizsgált fo-ti készítmények ösztrogénaktivitása 409 ± 55 pmol / liter ösztradiol-ekvivalens volt egy mikrogramm gyógynövényben, ami a 17β-ösztradiol aktivitásának 1/300-a. Klinikai vizsgálatok folynak az ösztrogén bioaktivitás meghatározására nőknél, akik ezeket a gyógynövényeket tartalmazó étrend-kiegészítőket használják.

A nők egészségének egyik legfontosabb kérdése az ösztrogénpótló terápia kockázatait és előnyeit érinti. . A standard ösztrogénpótló terápia folyamatos bizonytalansága és konszenzusának hiánya azonban sok nőt arra késztetett, hogy alternatív ösztrogénforrásokat keressen, beleértve a gyógynövényes szereket is (1). A rendelkezésre álló készítményekben számos gyógynövényt használnak, amelyek közül a leggyakoribb: vörös lóhere, dong quai, cohosh, szója, édesgyökér és tiszta fa bogyó. Annak ellenére, hogy az ösztrogén-szerű hatásukhoz használt gyógynövények jelentős múltra tekintettek vissza, csak nemrégiben jelentettek ilyen ösztrogén aktivitás méréséről néhány ilyen gyógynövényt (2–9). Ezenkívül nem végeztek sok ellenőrzött vizsgálatot ezen készítmények nőkre gyakorolt hatásáról. Továbbra sincs konszenzus ezeknek a kiegészítőknek a használatával, az adagolással vagy a hosszú távú biztonságossággal kapcsolatban.

Korábban kimutattuk, hogy az ösztradiol esetében rekombináns sejtbiológiai vizsgálatot alkalmaztunk az ösztradiol nagyon alacsony szintjének felmérésére. gyermekek és posztmenopauzás nők szérumában (10–16). Ez a vizsgálat az ösztrogén aktivitást méri az ösztrogén receptor (ER) a kötésével az élesztő rendszerben, amelyet transzformálnak egy ösztrogén válasz elemeket kódoló plazmiddal és egy ERα kódoló plazmiddal (17). Ennek a módszertannak az adaptációjával megkíséreltük felmérni az ösztrogén bioaktivitását a következő gyógynövényekben: vörös lóhere (Trifolium pretense L.), dong quai (Angelica sinensis), fekete cohosh (Cimicifuga racemosa), szója, édesgyökér (Glycyrrhiza glabra) ), tiszta fa bogyó (Vitex agnus-castus L.), fo-ti (Polygonum multiflorum) és komló (Humulus lupulus L.).

Anyagok és módszerek

Gyógynövény kivonása

A tiszta fa bogyó, a fekete cohosh, a vörös lóhere, a dong quai, a fo-ti, az édesgyökér, a komló, a szója és a szója aglikon (SoyA) ösztrogén aktivitását az alábbiak szerint elemeztük. A szárított gyógynövénykivonatokat a Natural Alternative International-től (San Marcos, Kalifornia) kaptuk, mielőtt étrend-kiegészítő kapszulákba keverjük őket. Az extrakcióhoz mindegyik gyógynövényből 60 milligrammot használtak fel, a szója és a szója kivételével, amelyekhez 3 mg-ot használtak. Az összes gyógynövényt 2 ml metanollal extraháltuk, az édesgyökér kivételével, amelyet 2 ml éterrel extraháltunk. A gyógynövényt és az oldószert 2 percig vortexeljük, majd 10 percig 3000 fordulat / perc sebességgel centrifugáljuk. A felülúszót eltávolítottuk és 0,45 μm-es üvegfecskendő-szűrőn átszűrtük, és szobahőmérsékleten tároltuk felhasználás céljából.

Ösztrogénvizsgálat

Az ösztradiol biológiai vizsgálatát korábban részletesen leírtuk (17). Az ösztrogén aktivitását az ER kötése határozza meg egy géntechnológiával módosított élesztő rendszerben. Röviden: Saccharomyces cerevisiae törzset használ, amelyet két plazmiddal transzformálnak. Az egyik plazmid tartalmazza a humán ER komplementer DNS-t, a másik pedig egy ösztrogén-válasz elemet tartalmaz az élesztő izo-1-citokróm C promótertől elülső irányban, fuzionálva a β-galaktozidáz szerkezeti génjével. A transzformált élesztőt szelektív táptalajon növesztjük gyógynövénykivonat jelenlétében. A β-galaktozidáz aktivitást meghatározzuk és ösztradiol-ekvivalens egységekké alakítjuk lineáris interpolációval egy standard görbéből, amelyet úgy állítunk elő, hogy ismert mennyiségű ösztradiolt adunk a vizsgálati közeghez. A biológiai vizsgálat érzékenysége a vizsgálat ideje alatt 0,02–2 pg / ml (0,07–7 pmol / liter) volt.

Statisztika

Mindegyik gyógynövénykivonatot három példányban elemeztük, és három egymást követő vizsgálat során megismételtük. Az ösztradiol-ekvivalenseket interpolációval számítottuk egy standard görbéből, amelyet ismert tápközegben, 17β-ösztradiol mennyiséggel készítettünk. (1. ábra). Ezért az eredményeket ösztradiol-ekvivalensben fejezzük ki pikomol / liter / mikrogramm száraz gyógynövény-kivonatban. Minden adatot átlag ± sd-ként fejezünk ki. A csoportok összehasonlítását többváltozós ANOVA alkalmazásával végeztük post hoc korrekcióval (a legkisebb statisztikai különbség). A különbségeket P < 0,05-nél szignifikánsnak tekintettük.

Eredmények

Mérhető ösztrogén aktivitását a vörös lóhere, a fo-ti, a komló, a szója és az édesgyökér esetében mutatták ki, míg a tiszta fa bogyóban, a fekete cohoshban vagy a dong quai-ban semmit sem találtak (1. táblázat). Amint a 2. ábrán látható, a kimutatható ösztrogén aktivitású gyógynövények közül az aglikozilezett szója (SoyA) találták a legtöbb ösztradiol-ekvivalens mennyiséget, összehasonlítva a többivel, beleértve a szóját is. A vörös lóhere és a fo-ti esetében is jelentős ösztrogén bioaktivitást állapítottak meg. Az édesgyökérnek és a komlónak lényegesen alacsonyabb az ösztrogén aktivitása, mint a fo-ti-nek. Az ösztrogén aktivitás kimutatásáról a fo-ti-ben korábban nem számoltak be.