Uno de los problemas más importantes en los problemas de salud de la mujer los riesgos y beneficios de la terapia de reemplazo de estrógenos. La incertidumbre continua y la falta de consenso con respecto a la terapia de reemplazo de estrógenos ha llevado a muchas mujeres a buscar fuentes alternativas de estrógeno, incluidos los remedios a base de hierbas. Adaptamos un bioensayo de células recombinantes para medir la bioactividad de los estrógenos en las hierbas. Estudiamos, in vitro, la bioactividad de los estrógenos en trébol rojo, dong quai, cohosh negro, soja, regaliz, baya de árbol casto, fo-ti y lúpulo. La soja, el trébol, el regaliz y el lúpulo tienen una gran cantidad de bioactividad de estrógenos medible, como se sospecha, según informes anteriores que utilizan otros métodos. Descubrimos una actividad de estrógeno sorprendentemente alta en extractos de fo-ti no reportados previamente. La baya del árbol casto, el cohosh negro y el dong quai no tuvieron actividad mensurable con este método. También descubrimos que la eliminación de un grupo glicona de la soja aumenta significativamente su bioactividad de estrógenos. Concluimos que este bioensayo de células recombinantes para estradiol se puede utilizar para medir la bioactividad en productos herbales. Las preparaciones de fo-ti estudiadas tenían una actividad estrogénica de 409 ± 55 pmol / litro de equivalentes de estradiol por microgramo de hierba, que es 1/300 de la actividad del 17β-estradiol. Se están realizando estudios clínicos para determinar la bioactividad de los estrógenos en mujeres que usan suplementos dietéticos que contienen estas hierbas.

UNO DE LOS problemas más importantes en la salud de la mujer se refiere a los riesgos y beneficios de la terapia de reemplazo de estrógenos . Sin embargo, la incertidumbre continua y la falta de consenso sobre la terapia estándar de reemplazo de estrógenos ha llevado a muchas mujeres a buscar fuentes alternativas de estrógeno, incluidos los remedios a base de hierbas (1). Hay varias hierbas que se utilizan en las preparaciones disponibles, de las cuales las más comunes incluyen: trébol rojo, dong quai, cohosh, soja, regaliz y baya de árbol casto. A pesar de un historial considerable de hierbas utilizadas por sus efectos similares a los del estrógeno, solo recientemente ha habido informes sobre la medición de la actividad estrogénica en algunas de estas hierbas (2-9). Además, no se han realizado muchos estudios controlados del efecto de estos preparados en mujeres. No existe consenso sobre el uso, la dosificación o la seguridad a largo plazo de estos suplementos.

Anteriormente, hemos demostrado el uso de un bioensayo de células recombinantes para el estradiol para evaluar los niveles muy bajos de estradiol en el suero de niños y mujeres posmenopáusicas (10–16). Este ensayo mide la actividad de los estrógenos mediante la unión del receptor de estrógenos (ER) α en un sistema de levadura transformado con un plásmido que codifica elementos de respuesta a estrógenos y un plásmido que codifica ERα (17). Utilizando una adaptación de esta metodología, hemos intentado evaluar la bioactividad de los estrógenos en las siguientes hierbas: trébol rojo (Trifolium pretense L.), dong quai (Angelica sinensis), cohosh negro (Cimicifuga racemosa), soja, regaliz (Glycyrrhiza glabra ), baya de árbol casto (Vitex agnus-castus L.), fo-ti (Polygonum multiflorum) y lúpulo (Humulus lupulus L.).

Materiales y métodos

Extracción de hierbas

Se analizaron bayas de árbol casto, cohosh negro, trébol rojo, dong quai, fo-ti, regaliz, lúpulo, soja y aglicona de soja (SoyA) para determinar la actividad estrogénica de la siguiente manera. Los extractos de hierbas secas se obtuvieron de Natural Alternative International (San Marcos, CA) antes de mezclarlos en cápsulas de suplementos dietéticos. Se utilizaron sesenta miligramos de cada hierba para la extracción, con la excepción de la soja y la SoyA, para las cuales se utilizaron 3 mg. Todas las hierbas se extrajeron con 2 ml de metanol, excepto el regaliz, que se extrajo con 2 ml de éter. La hierba y el disolvente se agitaron en vórtex durante 2 min y se centrifugaron a 3000 rpm durante 10 min. El sobrenadante se eliminó y se filtró a través de un filtro de jeringa de vidrio de 0,45 μm y se almacenó a temperatura ambiente para su uso.

Ensayo de estrógenos

El bioensayo para estradiol se describió previamente en detalle (17). La actividad de los estrógenos se define por la unión a ER en un sistema de levadura modificado genéticamente. En resumen, utiliza una cepa de Saccharomyces cerevisiae que se transforma con dos plásmidos. Un plásmido contiene el ADN complementario de ER humano, y el otro contiene un elemento de respuesta a estrógenos aguas arriba del promotor de iso-1-citocromo C de levadura fusionado al gen estructural de la β-galactosidasa. La levadura transformada se cultiva en medios selectivos en presencia de extracto de hierba. La actividad de la β-galactosidasa se ensaya y se convierte en unidades equivalentes de estradiol mediante interpolación lineal a partir de una curva estándar construida añadiendo cantidades conocidas de estradiol al medio de ensayo. La sensibilidad del bioensayo fue de 0,02 a 2 pg / ml (0,07 a 7 pmol / litro) durante el tiempo del estudio.

Estadísticas

Cada extracto de hierba se analizó por triplicado y se repitió durante tres ensayos consecutivos. Los equivalentes de estradiol se calcularon por interpolación a partir de una curva estándar construida en medio de ensayo con cantidades conocidas de 17β-estradiol. (Figura 1). Por lo tanto, los resultados se expresan en equivalentes de estradiol en picomoles por litro por microgramo de extracto de hierba seca. Todos los datos se expresan como la media ± de. Las comparaciones entre grupos se realizaron mediante un ANOVA multivariado con corrección post hoc (mínima diferencia estadística). Las diferencias se consideraron significativas a P < 0.05.

Resultados

Estrógenos medibles se demostró actividad en el trébol rojo, fo-ti, lúpulo, soja y regaliz, mientras que no se encontró ninguna en la baya del árbol casto, el cohosh negro o el dong quai (Cuadro 1). Como se muestra en la Figura 2, entre las hierbas con actividad estrogénica detectable, se encontró que la soja aglicosilada (SoyA) contenía la mayor cantidad de equivalentes de estradiol, en comparación con las otras, incluida la soja. También se identificó una bioactividad considerable de los estrógenos en el trébol rojo y el fo-ti. El regaliz y el lúpulo tenían una actividad estrogénica significativamente menor que el fo-ti. La detección de actividad estrogénica en fo-ti no se ha informado previamente.