Lady Macbeth é uma das personagens femininas mais famosas e assustadoras de Shakespeare. Quando a vemos pela primeira vez, ela já está tramando o assassinato de Duncan e é mais forte, mais implacável e mais ambiciosa do que seu marido. Ela parece estar totalmente ciente disso e sabe que terá que forçar Macbeth a cometer um assassinato. A certa altura, ela desejou não ser mulher para poder fazer isso sozinha. Este tema da relação entre gênero e poder é a chave para o caráter de LadyMacbeth: seu marido implica que ela é uma alma masculina habitando um corpo feminino, o que parece ligar a masculinidade à ambição e à violência. Shakespeare, no entanto, parece usá-la, e também as bruxas, para minar a ideia de Macbeth de que “coragem destemida deve se compor / Nada além de homens” (1.7.73-74). Essas mulheres astutas usam métodos femininos de alcançar o poder – isto é, manipulação – para promover suas ambições supostamente masculinas. As mulheres, sugere a peça, podem ser tão ambiciosas e cruéis quanto os homens, mas as restrições sociais negam-lhes os meios de perseguir essas ambições por conta própria.
Lady Macbeth manipula o marido com notável eficácia, superando todas as suas objeções; quando ele hesita em assassinar, questiona repetidamente sua masculinidade até que sente que deve cometer assassinato para provar a si mesmo. A notável força de vontade de Lady Macbeth persiste através do assassinato do rei – é ela quem acalma os nervos de seu marido imediatamente após o crime. Depois disso, porém, ela começa a escorregar lentamente para a loucura – assim como a ambição a afeta mais fortemente do que Macbeth antes do crime, a culpa a atormenta com mais força depois. No final da peça, ela foi reduzida a um sonâmbulo pelo castelo, tentando desesperadamente lavar uma mancha de sangue invisível. Uma vez que o sentimento de culpa volta para o poleiro, a sensibilidade de Lady Macbeth se torna uma fraqueza, e ela é incapaz de lidar com isso. Significativamente, ela (aparentemente) se mata, sinalizando sua total incapacidade de lidar com o legado de seus crimes.
