Een van de belangrijkste problemen bij de gezondheid van vrouwen de risico’s en voordelen van oestrogeensubstitutietherapie. Voortdurende onzekerheid en gebrek aan consensus over oestrogeensubstitutietherapie hebben veel vrouwen ertoe aangezet om alternatieve bronnen van oestrogeen te zoeken, waaronder kruidengeneesmiddelen. We hebben een bioassay met recombinante cellen aangepast om de bioactiviteit van oestrogeen in kruiden te meten. We bestudeerden in vitro de oestrogeen-bioactiviteit in rode klaver, dong quai, zilverkaars, soja, zoethout, kuisboombes, fo-ti en hop. Soja, klaver, zoethout en hop hebben een grote hoeveelheid meetbare oestrogeen-bioactiviteit, zoals vermoed, op basis van eerdere rapporten met andere methoden. We ontdekten een verrassend hoge oestrogeenactiviteit in extracten van fo-ti die niet eerder werden gerapporteerd. Kuisboombes, zilverkaars en dong quai hadden geen meetbare activiteit met deze methode. We ontdekten ook dat het verwijderen van een glycongroep uit soja de bioactiviteit van oestrogeen aanzienlijk verhoogt. We concluderen dat deze recombinante cel bioassay voor estradiol kan worden gebruikt om bioactiviteit in kruidenproducten te meten. De preparaten van fo-ti die zijn onderzocht, hadden een oestrogeenactiviteit van 409 ± 55 pmol / liter oestradiol-equivalenten per microgram kruid, wat 1 / 300ste is van de activiteit van 17β-oestradiol. Er zijn klinische onderzoeken gaande om de bioactiviteit van oestrogeen te bepalen bij vrouwen die voedingssupplementen gebruiken die deze kruiden bevatten.

EEN VAN DE belangrijkste kwesties in de gezondheid van vrouwen betreft de risico’s en voordelen van oestrogeensubstitutietherapie . Door voortdurende onzekerheid en gebrek aan consensus over standaard oestrogeensubstitutietherapie zijn veel vrouwen echter op zoek gegaan naar alternatieve bronnen van oestrogeen, waaronder kruidengeneesmiddelen (1). Er worden verschillende kruiden gebruikt in de beschikbare preparaten, waarvan de meest voorkomende zijn: rode klaver, dong quai, cohosh, soja, zoethout en kuisboombes. Ondanks een aanzienlijke geschiedenis van kruiden die worden gebruikt vanwege hun oestrogeenachtige effecten, zijn er pas onlangs meldingen geweest van metingen van de oestrogene activiteit in sommige van deze kruiden (2–9). Bovendien zijn er niet veel gecontroleerde onderzoeken geweest naar het effect van deze preparaten bij vrouwen. Er bestaat geen consensus over het gebruik, de dosering of de veiligheid op lange termijn van deze supplementen.

Eerder hebben we het gebruik van een recombinante celbiotest voor estradiol aangetoond om de zeer lage niveaus van estradiol te beoordelen in het serum van kinderen en postmenopauzale vrouwen (10-16). Deze test meet de oestrogeenactiviteit door binding van oestrogeenreceptor (ER) α in een gistsysteem dat is getransformeerd met een plasmide dat codeert voor oestrogeenresponselementen en een plasmide dat codeert voor ERα (17). Met behulp van een aanpassing van deze methodologie hebben we geprobeerd de biologische activiteit van oestrogeen in de volgende kruiden te beoordelen: rode klaver (Trifolium pretense L.), dong quai (Angelica sinensis), zilverkaars (Cimicifuga racemosa), soja, zoethout (Glycyrrhiza glabra ), kuisboombes (Vitex agnus-castus L.), fo-ti (Polygonum multiflorum) en hop (Humulus lupulus L.).

Materialen en methoden

Kruidenextractie

Kuisboombes, zilverkaars, rode klaver, dong quai, fo-ti, zoethout, hop, soja en soja-aglycon (SoyA) werden als volgt geanalyseerd op oestrogeenactiviteit. Gedroogde kruidenextracten werden verkregen van Natural Alternative International (San Marcos, CA) voordat ze werden verwerkt tot voedingssupplementcapsules. Van elk kruid werd zestig milligram gebruikt voor extractie, met uitzondering van soja en soja, waarvoor 3 mg werd gebruikt. Alle kruiden werden geëxtraheerd met 2 ml methanol, behalve drop, dat werd geëxtraheerd met 2 ml ether. Kruid en oplosmiddel werden 2 minuten gewerveld en 10 minuten gecentrifugeerd bij 3000 tpm. Supernatant werd verwijderd en gefiltreerd door een glazen injectiespuitfilter van 0,45 μm en voor gebruik bij kamertemperatuur bewaard.

Oestrogeentest

De bioassay voor oestradiol werd eerder in detail beschreven (17). Oestrogeenactiviteit wordt gedefinieerd door ER-binding in een genetisch gemanipuleerd gistsysteem. In het kort gebruikt het een stam van Saccharomyces cerevisiae die is getransformeerd met twee plasmiden. Het ene plasmide bevat het complementaire DNA van menselijk ER en het andere bevat een oestrogeenresponselement stroomopwaarts van de gist iso-1-cytochroom C-promotor gefuseerd met het structurele gen voor β-galactosidase. De getransformeerde gist wordt gekweekt in selectieve media in aanwezigheid van kruidenextract. β-galactosidase-activiteit wordt getest en omgezet in oestradiol-equivalente eenheden door lineaire interpolatie van een standaardcurve geconstrueerd door bekende hoeveelheden oestradiol toe te voegen aan testmedia. De gevoeligheid van de bioassay was 0,02–2 pg / ml (0,07–7 pmol / liter) gedurende de duur van het onderzoek.

Statistieken

Elk kruidenextract werd in drievoud geanalyseerd en gedurende drie opeenvolgende testen herhaald. Estradiol-equivalenten werden berekend door interpolatie uit een standaardcurve geconstrueerd in testmedia met bekende hoeveelheden 17p-estradiol. (Figuur 1). Daarom worden de resultaten uitgedrukt in estradiolequivalenten in picomol per liter per microgram droog kruidenextract. Alle gegevens worden uitgedrukt als de gemiddelde ± sd. Vergelijkingen tussen groepen werden gemaakt met behulp van een multivariate ANOVA met post-hoccorrectie (kleinste statistisch verschil). Verschillen werden als significant beschouwd bij P < 0,05.

Resultaten

Meetbaar oestrogeen activiteit werd aangetoond in rode klaver, fo-ti, hop, soja en zoethout, terwijl er geen werd gevonden in kuise boombes, zilverkaars of dong quai (tabel 1). Zoals getoond in Fig. 2, bleek van de kruiden met detecteerbare oestrogeenactiviteit, geaglycosyleerde soja (SoyA) de hoogste hoeveelheid oestradiol-equivalenten te bevatten, vergeleken met de andere, inclusief soja. Ook in rode klaver en fo-ti werd een aanzienlijke bioactiviteit van oestrogenen vastgesteld. Zoethout en hop hadden een significant lagere oestrogeenactiviteit dan fo-ti. De detectie van oestrogeenactiviteit in fo-ti is niet eerder gerapporteerd.