Et af de vigtigste spørgsmål i kvinders sundhed risiciene og fordelene ved østrogenerstatningsterapi. Kontinuerlig usikkerhed og mangel på konsensus om østrogenerstatningsterapi har fået mange kvinder til at søge alternative kilder til østrogen, herunder naturlægemidler. Vi tilpassede et rekombinant cellebioassay til måling af østrogenbioaktivitet i urter. Vi undersøgte in vitro østrogenbioaktivitet i rødkløver, dong quai, sort cohosh, soja, lakrids, kysk træbær, fo-ti og humle. Soja, kløver, lakrids og humle har en stor mængde målbar østrogenbioaktivitet, som mistænkt, baseret på tidligere rapporter ved hjælp af andre metoder. Vi opdagede overraskende høj østrogenaktivitet i ekstrakter af fo-ti, der ikke tidligere er rapporteret. Kysk træbær, sort cohosh og dong quai havde ikke målbar aktivitet med denne metode. Vi opdagede også, at fjernelse af en glycongruppe fra soja øger østrogenbioaktiviteten betydeligt. Vi konkluderer, at dette rekombinante cellebioassay for østradiol kan bruges til at måle bioaktivitet i naturlægemidler. Præparaterne af undersøgt fo-ti havde østrogenaktivitet på 409 ± 55 pmol / liter østradiolækvivalenter pr. Mikrogram urt, hvilket er 1/300 aktiviteten af 17β-østradiol. Kliniske undersøgelser er i gang for at bestemme østrogenbioaktiviteten hos kvinder, der bruger kosttilskud, der indeholder disse urter. . Imidlertid har kontinuerlig usikkerhed og manglende konsensus om standard østrogenerstatningsterapi fået mange kvinder til at søge alternative kilder til østrogen, herunder urtemedicin (1). Der er flere urter, der anvendes i de tilgængelige præparater, hvoraf de mest almindelige inkluderer: rødkløver, dong quai, cohosh, soja, lakrids og kysk træbær. På trods af en betydelig historie med urter, der er brugt til deres østrogenlignende virkning, har der først for nylig været rapporter om måling af østrogen aktivitet i nogle af disse urter (2–9). Derudover har der ikke været mange kontrollerede undersøgelser af effekten af disse præparater hos kvinder. Der er ingen konsensus om brugen, doseringen eller den langsigtede sikkerhed af disse kosttilskud.

Tidligere har vi demonstreret brugen af et rekombinant cellebioassay for østradiol til vurdering af de meget lave niveauer af østradiol i serum hos børn og postmenopausale kvinder (10-16). Dette assay måler østrogenaktivitet gennem binding af østrogenreceptor (ER) α i et gærsystem transformeret med et plasmid, der koder østrogenresponselementer og et plasmid, der koder for ERa (17). Ved hjælp af en tilpasning af denne metode har vi forsøgt at vurdere østrogenens bioaktivitet i følgende urter: rødkløver (Trifolium pretense L.), dong quai (Angelica sinensis), sort cohosh (Cimicifuga racemosa), soja, lakrids (Glycyrrhiza glabra) ), kysk træbær (Vitex agnus-castus L.), fo-ti (Polygonum multiflorum) og humle (Humulus lupulus L.).

Materialer og metoder

Urteekstraktion

Kysk træbær, sort cohosh, rødkløver, dong quai, fo-ti, lakrids, humle, soja og soja-aglycon (SoyA) blev analyseret for østrogenaktivitet som følger. Ekstrakter af tørrede urter blev opnået fra Natural Alternative International (San Marcos, CA), før de blev blandet i kapsler med kosttilskud. Tres milligram af hver urt blev anvendt til ekstraktion med undtagelse af soja og SoyA, hvortil der blev anvendt 3 mg. Alle urter blev ekstraheret med 2 ml methanol bortset fra lakrids, der blev ekstraheret med 2 ml ether. Urter og opløsningsmiddel blev vortexbehandlet i 2 minutter og centrifugeret ved 3000 omdr./minut i 10 minutter. Supernatanten blev fjernet og filtreret gennem et 0,45 um glassprøjtefilter og opbevaret ved stuetemperatur til brug.

Østrogenanalyse

Bioassayet for østradiol blev beskrevet tidligere detaljeret (17). Østrogenaktivitet defineres ved ER-binding i et genetisk konstrueret gærsystem. Kort beskrevet bruger den en stamme af Saccharomyces cerevisiae, der transformeres med to plasmider. Det ene plasmid indeholder det humane ER-komplementære DNA, og det andet indeholder et østrogenresponselement opstrøms for gær-iso-1-cytochrom C-promotoren fusioneret til strukturgenet for β-galactosidase. Den transformerede gær dyrkes i selektive medier i nærværelse af urteekstrakt. β-galactosidaseaktivitet analyseres og omdannes til estradiolækvivalente enheder ved lineær interpolering fra en standardkurve konstrueret ved tilsætning af kendte mængder østradiol til analysemedier. Følsomheden af bioassayet var 0,02-2 pg / ml (0,07-7 pmol / liter) i løbet af undersøgelsestiden.

Statistik

Hvert urtekstrakt blev analyseret i tre eksemplarer og gentaget over tre på hinanden følgende assays. Estradiolækvivalenter blev beregnet ved interpolering ud fra en standardkurve konstrueret i analysemedier med kendte mængder af 17β-østradiol. (Fig. 1). Derfor udtrykkes resultaterne i østradiolækvivalenter i picomoler pr. Liter pr. Mikrogram tørt urtekstrakt. Alle data udtrykkes som middelværdien ± sd. Sammenligninger mellem grupper blev foretaget ved hjælp af en multivariat ANOVA med post hoc-korrektion (mindst statistisk forskel). Forskelle blev betragtet som signifikante ved P < 0,05.

Resultater

Målbar østrogen aktivitet blev demonstreret i rødkløver, fo-ti, humle, soja og lakrids, hvorimod ingen blev fundet i kysk træbær, sort cohosh eller dong quai (tabel 1). Som vist i fig. 2 viste det sig, at aglycosyleret soja (SoyA) blandt de urter med detekterbar østrogenaktivitet indeholdt den højeste mængde østradiolækvivalenter sammenlignet med de andre inklusive soja. Betydelig østrogenbioaktivitet blev også identificeret i rødkløver og fo-ti. Lakrids og humle havde signifikant lavere østrogenaktivitet end fo-ti. Påvisning af østrogenaktivitet i fo-ti er ikke tidligere rapporteret.