Lady Macbeth er en af Shakespeares mest berømte og skræmmende kvindelige tegn. Da vi først ser hende, planlægger hun allerede Duncans mord, og hun er stærkere, mere hensynsløs og mere ambitiøs end sin mand. Hun synes fuldt ud klar over dette og ved, at hun bliver nødt til at skubbe Macbeth til at begå mord. På et tidspunkt ønskede hun, at hun ikke var kvinde, så hun selv kunne gøre det. Temaet om forholdet mellem køn og magt er nøglen til LadyMacbeths karakter: hendes mand antyder, at hun er en maskulin sjæl, der bor i en kvindelig krop, som synes at forbinde maskulinitet med ambition og vold. Shakespeare ser imidlertid ud til at bruge hende og hekse til at undergrave Macbeths idé om, at “uforsøgt mettle skal komponere / intet andet end mænd” (1.7.73-74). Disse smarte kvinder bruger kvindelige metoder til at opnå magt – det vil sige manipulation – for at fremme deres angiveligt mandlige ambitioner. Kvinder, stykket antyder, kan være lige så ambitiøse og grusomme som mænd, yetsociale begrænsninger nægter dem midlerne til at forfølge disse ambitioner til deres egne.
Lady Macbeth manipulerer sin mand med bemærkelsesværdig effektivitet, altoverskyggende alle hans indvendinger; når han tøver med at myrde, stiller han gentagne spørgsmålstegn ved sin manddom, indtil han føler, at han må begå mord for at bevise sig selv. Lady Macbeths bemærkelsesværdige styrke af viljemænd gennem mordet på kongen – det er hun, der støtter hendes mands nerver umiddelbart efter forbrydelsen er Efterfølgende begynder hun imidlertid en langsom glidning i vanvid – ligesom ambitionen påvirker hende stærkere end Macbeth før forbrydelsen, så plager skyld hende stærkere bagefter. Ved afslutningen af stykket er hun blevet reduceret til at gå gennem slottet og forsøger desperat at vaske en usynlig blodplet væk. Når først skyldfølelsen kommer hjem for, bliver Lady Macbeths følsomhed en svaghed, og hun er ude af stand til at klare det. Det er vigtigt, at hun (tilsyneladende) dræber sig selv og signaliserer sin totale manglende evne til at håndtere arven fra deres forbrydelser.
