54. regiment, fuldt ud Femteogfyrre Massachusetts frivilligt infanteriregiment, Massachusetts infanterienhed bestående af afroamerikanere, der var aktive under den amerikanske civile Krig (1861–65). Det 54. regiment blev berømt for sin kampdygtighed og for dets medlemmers store mod. Dens udnyttelse blev afbildet i 1989-filmen Glory.
Den afskaffende guvernør i Massachusetts, John Andrew, samlede det 54. regiment i begyndelsen af 1863 efter at have modtaget tilladelse til gør det fra den amerikanske krigsminister Edwin Stanton. Selvom alle regimentets officerer var hvide – en kendsgerning, der forstyrrede mange nordlige ledere på det tidspunkt – overtalte Andrews åbenlyse fortalervirksomhed mange fremtrædende afroamerikanere til at støtte ideen. Blandt dem, der aktivt rekrutterede til enheden, var Frederick Douglass, Martin Delany, Henry Highland Garnet og John Mercer Langston. De og andre ledere mente, at hvis det 54. regiment kunne lykkes i kamp, ville anklager om racemæssig mindreværd, så hyppige på det tidspunkt, blive undermineret afgørende. På grund af den omfattende rekrutteringsindsats trak det 54. regiment, i modsætning til andre borgerkrigsenheder, sine rækker fra hele det nordlige USA og videre, inklusive nogle konfødererede stater, Canada og Vestindien.
Ledet af Oberst Robert Gould Shaw, medlem af en fremtrædende afskaffelsesfamilie i Boston, markerede det 54. regiment sig snart i kamp. Dens første succes kom den 16. juli 1863 på Sea Islands ud for South Carolina, hvor enheden frastødte et konfødereret angreb på James Island. Bare to dage senere kom en mere afgørende test. I et angreb på Fort Wagner på Morris Island i Charleston, South Carolina, kæmpede det 54. regiment modigt med en stærkere konfødereret styrke. Mere end halvdelen af regimentet gik tabt i kampen. For hans mod i Fort Wagner, Sgt. William H. Carney blev den første afroamerikaner, der fik Medal of Honor, landets højeste militære pris.
Opførelsen af det 54. regiment i Fort Wagner overbeviste mange nordlige ledere om, at afroamerikanere kunne være gode soldater, som banede vejen for yderligere ansættelse af afroamerikanere i krigsindsatsen. Ved afslutningen af borgerkrigen havde mere end 178.000 afroamerikanere tjent i EU-hæren og spillet en afgørende rolle i den nordlige sejr. Eksperimentet med at tillade afroamerikanere i militæret havde været en rungende succes.
Desværre var slagmarkens modgang ikke de eneste vanskeligheder, som det 54. regiment måtte udholde. Den føderale regering afviste sin oprindelige garanti for, at den ville betale sorte soldater det samme som hvide soldater. Som svar førte regimentet andre afroamerikanske enheder til at nægte at acceptere penge fra den føderale regering i næsten et år. Under truslen om mytteri fra afroamerikanske enheder og over for et stigende pres fra antislaveri-kongresmedlemmer og en stor brevskrivningskampagne, der blev ført af soldaterne og deres tilhængere, tildelte den føderale regering endelig lige løn i juni 1864. Regimentet blev mønstret ud af hær efter krigen i august 1865.