Função
O intervalo post-mortem (PMI) tem sido tradicionalmente classificado em três estágios – imediato, precoce e tarde.
Imediato PMI
No período imediato, o corpo passa por rápidas mudanças bioquímicas e fisiológicas que são causadas principalmente pela ausência de circulação do sangue e perda dos mecanismos reguladores. Essas alterações são detectáveis principalmente nos olhos e na pele. Aos olhos, o “transporte” ou segmentação dos vasos sanguíneos da retina é um dos primeiros sinais observáveis. Este sinal se apresenta como uma quebra na coluna contínua de sangue no exame oftalmoscópico dos olhos e geralmente ocorre dentro de meia hora e às vezes pode demorar até 2 horas após a morte. As outras alterações nos olhos, na fase post-mortem imediata, incluem perda de pressão intraocular, bem como opacificação da córnea. A pressão intraocular diminui drasticamente após a morte e atinge 4 mmHg ou menos dentro de 6 horas após a morte. A córnea começa a turvar dentro de 2 horas após a morte e geralmente impede o exame intraocular com um oftalmoscópio. A pele perde elasticidade e brilho nas primeiras horas após a morte e fica pálida. O exame histológico da pele, no entanto, não mostra alterações morfológicas em 6 horas PMI. Outros exames mostram ausência de alterações celulares ou bioquímicas em 3 a 6 horas post-mortem. O esvaziamento do conteúdo gástrico é outro método usado para estimar o intervalo post-mortem. Pequenas refeições leves são esvaziadas do estômago em 1 a 3 horas, e o tempo de consumo, se conhecido – junto com o volume e o tipo de refeição, pode ser usado para estimar o intervalo post-mortem. A fase post-mortem imediata pode, portanto, ser denominada como o intervalo post-mortem entre a morte somática e celular, dentro de 2 a 3 horas após a morte, e geralmente denota uma falta de mudanças discerníveis na morfologia ou histoquímica.
PMI inicial
A fase post-mortem inicial é provavelmente o período de tempo mais importante para a estimativa do PMI, já que a maioria dos casos médico-legais são examinados neste período. Esse período também é onde a estimativa do tempo desde a morte é mais relevante para estabelecer a linha do tempo dos eventos e desenvolver uma teoria das circunstâncias da morte. Esse período vai de 3 a 72 horas após a morte. A fase inicial post-mortem é mais frequentemente estimada usando a tríade clássica de mudanças post-mortem – rigor mortis, livor mortis e algor mortis.
Algor Mortis
Algor mortis é o resfriamento do corpo após a morte, principalmente devido à perda da regulação homeostática pelo hipotálamo, em conjunto com a perda de calor para o ambiente por condução, convecção e radiação. Algor mortis é o método mais preciso de estimar TSD na fase post-mortem inicial. No entanto, envolve um procedimento complicado e requer conhecimento e pesquisa intensivos antes de ser utilizável com precisão no campo; isso se deve aos inúmeros fatores que afetam o gradiente de temperatura entre a temperatura corporal e a temperatura ambiente, sendo o mais inerente as diferenças nas temperaturas de diferentes localidades em diferentes pontos do tempo. Uma regra prática afirma que há uma diminuição de 1,5 graus F a cada hora. Vários gráficos, fórmulas e algoritmos foram desenvolvidos para estimar o PMI; O nomograma de Henssge é o mais amplamente ensinado. A estimativa de TSD usando algorit mortis mede as temperaturas retais e, embora tenham sido usados de forma consistente, nomogramas para as temperaturas do cérebro também foram desenvolvidos por Brinkmann et al. em 1976 e 1978 e por Henssge et al. em 1984.
Rigor Mortis
Rigor mortis é o enrijecimento post-mortem dos músculos, causado pela depleção de trifosfato de adenosina (ATP) dos músculos, que é necessária para a destruição de filamentos de actina-miosina nas fibras musculares. A actina e a miosina são componentes da fibra muscular e formam uma ligação covalente durante a contração. A interrupção do suprimento de oxigênio causa a interrupção da respiração aeróbica nas células e leva à falta de produção de ATP. O rigor mortis começa imediatamente após a morte e é geralmente visto em uma sequência conhecida como “marcha do rigor” e também chamada de Lei de Nysten. Enquanto o rigor mortis se desenvolve simultaneamente em todo o tecido muscular do corpo, voluntário e involuntário, o tamanho do músculo determina o perceptibilidade das mudanças pelo examinador. Os músculos menores da face – ao redor dos olhos, ao redor da boca, etc. são os músculos onde o rigor mortis aparece pela primeira vez, seguido pelo rigor mortis dos músculos das mãos e membros superiores e finalmente aparece no grandes músculos dos membros inferiores. O rigor mortis aparece aproximadamente 2 horas após a morte nos músculos da face, progride para os membros nas horas seguintes, completando-se entre 6 a 8 horas após a morte.O rigor mortis permanece por mais 12 horas (até 24 horas após a morte) e então começa a desaparecer. Na última fase do Rigor Mortis, o complexo actina-miosina formado começa a se desintegrar devido à proteólise, resultando na dissolução da rigidez. Esse processo começa em todas as células ao mesmo tempo, porém, assim como com a aparência, essa alteração é perceptível primeiro nos músculos menores da face, seguidos pelos músculos dos membros superiores e por fim nos grandes músculos dos membros inferiores. O rigor mortis geralmente desaparece 36 horas após a morte, seguido por uma fase conhecida como flacidez secundária.
Livor Mortis
A mudança final na tríade clássica é livor mortis, que é o púrpura – descoloração azulada da pele nas partes dependentes do corpo, devido ao acúmulo de sangue nos vasos da pele, causada pela atração gravitacional. A hipóstase se desenvolve como manchas de descoloração dentro de meia hora a 2 horas, essas manchas então se aglutinam para formar manchas maiores, que ainda se combinam para formar uma descoloração uniforme das partes dependentes do corpo que não foram submetidas à pressão, que aparece a partir de 6 a 12 horas. A descoloração torna-se “fixa” após um certo período, devido à desintegração das células sanguíneas e à infiltração de hemoglobina. Esta fixação é confirmada pela aplicação de pressão com os polegares e é tradicionalmente usada para denotar um PMI superior a 12 horas. Este método de estimativa de PMI exigiu uma abordagem objetiva e moderna, levando ao desenvolvimento de métodos colorimétricos para a estimativa de PMI de livor mortis.
Análise histo-morfológica
Outros métodos de estimar TSD na fase inicial inclui análises histo-morfológicas e bioquímicas. As contagens sanguíneas totais e diferenciais, bem como o exame morfológico microscópico do sangue, foram descritas como um método para estimar o TSD. Todas as células sanguíneas não foram identificáveis após 84 horas após a morte. Da mesma forma, as contagens de células sanguíneas também diminuíram além de 84 horas após a morte. Estudos histológicos da pele mostraram que alterações degenerativas aparecem na pele 6 horas após a morte e aparecem pela primeira vez como vacuolização do corpo basal e espinhoso. A separação dermoepidérmica foi observada 9 horas após a morte, enquanto a derme apresentou rarefação e desintegração 6 e 18 horas após a morte, respectivamente. O glicogênio na membrana basal das glândulas sudoríparas, o citoplasma das células secretoras, bem como as células ductais, se esgotam em 3 horas do PMI e levam a células PAS negativas na histologia. A membrana basal, no entanto, continua a mostrar uma coloração magenta até 18 horas pós-morte. As glândulas sudoríparas écrinas mostram vacuolização após 3 a 4 horas de PMI, e as células parecem ter se desintegrado completamente 15 horas após a morte. As glândulas sebáceas parecem normais até 18 horas post-mortem, visto como uma separação das camadas e desintegração da papila capilar. Estudos também mostraram que a pleocitose pode ser usada para estimar o PMI por meio de uma equação polinomial de terceira ordem. As células são principalmente linfócitos com uma fração significativa de macrófagos, que se tornam vacuolados e não identificáveis após 12 horas.
Avaliação bioquímica
A avaliação bioquímica do sangue não é significativa no post mortem imediato fase devido à falta de morte celular. Por outro lado, a morte celular torna a avaliação bioquímica do sangue na fase inicial extremamente difícil. Além disso, ocorre a redistribuição dos eletrólitos das células para o plasma e soro, resultando em alterações variáveis nos níveis desses eletrólitos. Essas variações e suas implicações são estudadas no campo emergente da tanatoquímica. A avaliação bioquímica tem sido útil para estimar PMI do humor vítreo, líquido sinovial, líquido pericárdico, urina e líquido cefalorraquidiano. Numerosos fatores, no entanto, precisam ser levados em consideração ao examinar o PMI com base na bioquímica, incluindo, mas não se limitando a, idade, sexo, histórico biológico, estilo de vida, causa da morte e toda uma gama de outros fatores intrínsecos e extrínsecos. Apenas alguns marcadores bioquímicos (de 388) tiveram investigação suficiente com essas considerações – nomeadamente potássio, sódio, ureia, bem como cloreto, magnésio, hipoxantina e troponina cardíaca T. A avaliação do seu potencial de uso foi considerada ser alarmante, com 0 (zero) marcadores bioquímicos sendo considerados como tendo pesquisa adequada e adequados para uso. Seis foram pesquisados adequadamente, mas não adequados para uso prático. Enquanto isso, verificou-se que 18 foram mal investigados e inadequados para aplicação, e outros 364 marcadores bioquímicos não tinham informações suficientes.
Reações supra-vitais
Reações supra-vitais também foram propostas como um meio de estimativa de PMI. A determinação do período de supra-vitalidade, portanto, pode auxiliar na estimativa do IPM.Para este método, Madea define o PMI em quatro estágios – o período de latência, onde apesar da paralisação da circulação, o tecido ainda realiza respiração aeróbia até o esgotamento de seus estoques – o período de sobrevivência, onde há perda da função do tecido, mas eles podem ser reativado usando estímulos externos, por exemplo, estimulação elétrica dos nervos – o período de ressuscitação, em que a capacidade de recuperação do tecido é completamente perdida – e o período supravital. Madea define supra-vitalidade como o período de sobrevivência do tecido após isquemia completa e irreversível. Esse conceito afirma que o período de sobrevivência abrange o período de latência, o período de ressuscitação abrange tanto o período de latência quanto o período de sobrevivência e o período de supra-vitalidade inclui todos os outros três. A supravitalidade também é diferente do período de reanimação, pois o tecido é excitável independentemente da recuperação da função. Por exemplo, o período de ressuscitação do músculo esquelético é de aproximadamente 2 a 3 horas, mas o período supravital em alguns casos pode se estender até 20 horas. Da mesma forma, os músculos cardíacos têm um período de reanimação de 3,5 a 4 minutos, enquanto o período supravital pode se estender por até 2 horas. Um método para estimar o PMI foi desenvolvido usando a excitabilidade elétrica de Orbicularis oculi usando eletrodos de superfície. Uma razão entre o tempo de relaxamento e a força máxima, chamada de tempo de relaxamento relacionado à força, foi considerada confiável para estimar o PMI. Também é importante considerar a supersensibilidade do tecido na fase post-mortem imediata, chamada de fenômeno de Zsako. A reação supra-vital, portanto, examina a contração idiomuscular ou local e não a contração de todo o músculo.
PMI tardio
A fase pós-morte tardia é o período quando o tecido corporal começa a se desintegrar e pode ser descrito principalmente como decomposição ou putrefação, formação de adipocere, mumificação ou esqueletização. O tecido complexo do corpo começa a se desintegrar em formas moleculares mais simples como resultado da degradação do tecido pela enzima ou bactéria do corpo, bem como bactérias que colonizam os restos mortais. O corpo sofre principalmente decomposição ou putrefação, resultando em descoloração esverdeada, inchaço devido à formação de gás e necrose liquefativa. A decomposição dos restos mortais depende do clima, da estação do ano, do peso corporal e das roupas. A decomposição pode se dividir em cinco estágios – fresco, decomposição inicial, decomposição avançada, esqueletização e decomposição extrema.
Fase fresca
A fase fresca pode começar em 24 horas ou mais tarde 7 dias após a morte, especialmente nos meses mais frios do inverno. Esta fase não mostra nenhuma atividade de insetos além da deposição de ovos de mosca nas cavidades e áreas de deiscência de tecido. A deposição de óvulos foi documentada em pacientes vivos, especialmente em indivíduos imóveis e debilitados.
Fase de decomposição inicial
A fase de decomposição inicial começa com o início do deslizamento da pele e queda de cabelo. Essas alterações geralmente começam no primeiro dia após a morte até cinco dias após a morte. Larvas também começam a aparecer no corpo, a partir do segundo dia post-mortem; o corpo aparece verde-acinzentado e marmorizado (algumas partes do corpo ainda podem parecer rosadas). A fossa ilíaca direita é a primeira parte do corpo a apresentar descoloração esverdeada e pode ser vista já no segundo dia pós-morte. Isso se deve à posição relativamente superficial do ceco. As extremidades aparecem acastanhadas com o ressecamento da pele, especialmente nos dedos, nariz e orelhas, geralmente começando no segundo dia pós-morte; o corpo parece esverdeado com distinto inchaço. A descoloração esverdeada, que começou na fossa ilíaca direita, progride para abarcar todo o abdome, com concomitante inchaço do abdome, que pode iniciar novamente no segundo dia. O inchaço avança para o resto do torso e subsequentemente para o corpo, resultando em crepitações por todo o corpo durante o manuseio. Essa fase também está associada à purga – liberação do fluido de decomposição dos orifícios – e a um odor forte e desagradável. O inchaço pode ser visto logo três dias após a morte e geralmente desaparece na segunda semana post-mortem, devido à interrupção dos gases abdominais; O corpo aparece verde-escuro na segunda semana; e, finalmente, o corpo parece preto-acastanhado com a aparência de couro da pele. Este estágio geralmente ocorre até o final do primeiro mês, mas pode se prolongar por até dois meses. O tecido subjacente também parece escurecido com a textura mudando para uma pasta viscosa e viscosa. Entre o décimo dia e o final do primeiro mês, a atividade do verme continua sob a pele coriácea, com a pele secando ainda mais para formar uma concha endurecida de couro, com perda de tecido mole subjacente.
Fase de decomposição avançada
A fase de decomposição avançada começa com o aparecimento de pele flácida e solta e o colapso da cavidade abdominal. O corpo também mostra extensa infestação de larvas. Essas alterações geralmente aparecem no quarto dia após a morte, mas podem começar dez dias após a morte. A perda de tecido mole, incluindo a perda da pele ressecada de couro, resulta na exposição de menos da metade do material esquelético. Essa fase geralmente está associada à presença de casos de pupa, bem como ao aparecimento de moldes no corpo e nas roupas; isso geralmente ocorre no segundo mês, mas pode ocorrer de seis a nove meses após a morte. A dessecação da pele externa pode acompanhar a retenção estrutural dos órgãos internos ou ser acompanhada por autólise e perda de órgãos internos. A decomposição pode progredir rapidamente em restos enterrados ou em restos deixados em um ambiente com alta umidade, resultando em extrema atividade de larvas, autólise acelerada e pode progredir diretamente para esqueletização ou formação de adipocere, sem dessecação e mumificação da pele e do tecido externo. Os restos mortais podem sofrer saponificação ou dessecação, chamada formação de adipocere e mumificação, respectivamente, dependendo do ambiente e das condições presentes. A presença de um ambiente quente e úmido sem oxigênio favorece o desenvolvimento de adipocere – uma substância cerosa que resulta da hidrólise bacteriana anaeróbica da gordura corporal. O organismo primário responsável pela formação do adipocere é o Clostridium perfringens, causando agregação de cristais de ácido graxo, resultando na perda do detalhe celular e também na perda da epiderme. A formação de adipocere e o tempo de duração dependem principalmente do pH, temperatura, umidade e falta de oxigênio no ambiente.
Fase de esqueletização
A fase de esqueletização resulta na exposição de mais mais da metade dos elementos do esqueleto, que ainda podem demonstrar tecido mole que ainda está preso. No entanto, a esqueletização geralmente está associada a tecido desidratado ou adipocere em menos da metade do corpo. O tecido dessecado aparece mais comumente nas inserções musculares ou ligamentares ao longo da coluna vertebral, bem como nas extremidades dos ossos longos. Enquanto isso, o adipocere é comumente visto sobre as coxas, com altos depósitos de gordura subcutânea. Esta fase aparece dois meses após a morte, embora geralmente se apresente entre dois e nove meses após a morte. A continuação da decomposição leva à exposição de todo o material ósseo, com apenas algum material gorduroso deixado para trás ou expondo ossos secos; isso geralmente é visto após seis meses de exposição, embora tenha sido relatado que ocorreu já na terceira semana. Este estágio pode durar anos se os elementos não forem expostos, como pode ser visto em restos enterrados ou em ambientes fechados.
Fase de decomposição extrema
A fase de decomposição extrema é vista apenas em restos que foram expostos ao meio ambiente e levam à erosão dos elementos do esqueleto. Esta erosão começa com o processo de branqueamento dos ossos e é comumente observada seis meses após a exposição, embora tenha sido documentado que aparece dois meses após a morte e dois anos e meio após a morte. Os elementos esqueléticos sofrem uma degeneração adicional da estrutura cortical, resultando em uma perda metafisária nos ossos longos e na exposição da parte esponjosa dos ossos esponjosos; isso é visto comumente entre um ano a um ano e meio após a morte, embora tenha sido relatado que ocorreu já no quarto mês. A perda metafisária foi relatada como tendo ocorrido no PMI de cinco anos e meio.
Entomologia forense
A análise de entomologia forense tem sido uma prática de rotina para a estimativa de PMI no início e períodos pós-morte tardios. Existem dois métodos de estimativa usando entomologia forense – com base na sucessão e com base no desenvolvimento. Em uma abordagem baseada em sucessão, um modelo de sucessão adequado é escolhido para uso, aquele que corresponde às condições ambientais, incluindo as circunstâncias da morte. Portanto, a pesquisa forense sobre o efeito dos fatores ambientais na decomposição e sucessão de insetos é necessária. Mañas-Jordá demonstrou que diferentes táxons foram encontrados para serem prevalentes com base nas condições ambientais. A diversidade de espécies, bem como o número de indivíduos, foram examinadas. Eles não detectaram nenhuma associação de espécies com o Estágio I e II de decomposição, três espécies associadas ao Estágio III, duas espécies associadas ao Estágio IV e uma espécie associada ao Estágio V na Reserva Natural Huitepec.Na cidade de San Cristóbal de las Casas, quatro espécies foram encontradas associadas ao Estágio II, três espécies foram encontradas associadas ao Estágio III, apenas uma espécie Chrysomyarufifacies (Macquart; Diptera: Calliphoridae) e Fannia sp1 associada ao Estágio IV e, por último, Stilpon sp1 foi encontrado para ser associado ao Estágio V.
A abordagem baseada no desenvolvimento olha para a presença de diferentes estágios do inseto no corpo, bem como na área circundante, para ajudar a estimar PMI. Matuszewski usou L. caesar (Diptera: Calliphoridae), Thanatophilus sinuatus e N. littoralis (Coleoptera: Silphidae) em sua pesquisa para demonstrar que a presença de um estágio de desenvolvimento e a ausência dos estágios subsequentes de desenvolvimento de insetos carniceiros podem ser usados em em conjunto com a estimativa de seu intervalo de pré-aparecimento (PAI) para desenvolver uma estimativa confiável de PMI. É, portanto, essencial estabelecer valores de PAI conhecidos para diferentes insetos no ambiente sob exame.
Avaliação molecular
Avanços recentes na biologia molecular levaram a vários avanços na estimativa de PMI. A degeneração de mRNA, DNA e proteínas são avaliadas e podem ser usadas para estimar o PMI. Os transcritos de RNA foram considerados os mais relevantes devido à sua rápida degeneração e correlação temporal. Vários estudos demonstraram uma correlação linear entre PMI e degeneração. Verificou-se que esta correlação é dependente da temperatura e do tecido.
Um estudo do Porto, Portugal examinou 11 transcritos de genes para correlação com TSD. 8 tecidos murinos foram divididos em três grupos com base na estabilidade do RNA – primeiro grupo (I) composto por amostras de tecido do coração, baço e pulmão, segundo grupo (II) composto por quadríceps femoral, fígado e estômago e o terceiro grupo (III) Pâncreas e pele. As amostras dos grupos I e II foram analisadas em série. A análise mostrou que a degeneração do RNA era dependente do tempo durante as 11 horas inteiras, embora nenhuma significância estatística tenha sido demonstrada nas primeiras quatro horas. Os pesquisadores selecionaram 11 genes para análise quantitativa de PCR. Embora o RNA no coração tenha sido considerado mais estável, ele não mostrou correlação com o PMI. Um total de seis genes foram encontrados para correlacionar com PMI, quatro no quadríceps femoral (Actb, Gapdh, Ppia e Srp72) e dois genes no fígado (Alb e Cyp2E1). Modelos matemáticos foram desenvolvidos para estimar o PMI com uma média de erro de 51,4 minutos.
