Funzione

L’intervallo post-mortem (PMI) è stato tradizionalmente classificato in tre fasi: immediato, precoce e tardi.

PMI immediate

Nell’immediato periodo, il corpo subisce rapidi cambiamenti biochimici e fisiologici che sono principalmente causati dall’assenza di circolazione sanguigna e dalla perdita dei meccanismi regolatori. Questi cambiamenti sono rilevabili principalmente negli occhi e nella pelle. Agli occhi, il “trasporto su camion” o la segmentazione dei vasi sanguigni retinici è uno dei primi segni osservabili. Questo segno si presenta come una rottura nella colonna di sangue continua all’esame oftalmoscopico degli occhi e di solito si verifica entro mezz’ora e talvolta può richiedere fino a 2 ore dopo la morte. Gli altri cambiamenti negli occhi, nella fase post mortem immediata, includono la perdita della pressione intraoculare e l’annebbiamento della cornea. La pressione intraoculare diminuisce drasticamente dopo la morte e raggiunge 4 mmHg o meno entro 6 ore dalla morte. La cornea inizia ad annebbiarsi entro 2 ore dalla morte e di solito impedisce l’esame intraoculare con un oftalmoscopio. La pelle perde elasticità e lucentezza entro le prime ore dalla morte e appare pallida. L’esame istologico della pelle, tuttavia, non mostra cambiamenti morfologici entro 6 ore PMI. Altri esami mostrano una mancanza di cambiamenti cellulari o biochimici entro 3-6 ore post-mortem. Lo svuotamento del contenuto gastrico è un altro metodo utilizzato per stimare l’intervallo post-mortem. Piccoli pasti leggeri vengono svuotati dallo stomaco entro 1-3 ore e il tempo di consumo, se noto, insieme al volume e al tipo di pasto, può essere utilizzato per stimare l’intervallo post mortem. La fase post-mortem immediata può, quindi, essere definita come l’intervallo post-mortem tra morte somatica e cellulare, entro 2-3 ore dalla morte, e di solito denota una mancanza di cambiamenti distinguibili nella morfologia o istochimica.

PMI precoce

La fase post-mortem iniziale è probabilmente il periodo di tempo più importante per la stima della PMI poiché la maggior parte dei casi medico-legali vengono esaminati in questo periodo di tempo. Questo periodo è anche il momento in cui la stima del tempo trascorso dalla morte è più rilevante per stabilire la cronologia degli eventi e sviluppare una teoria delle circostanze della morte. Questo periodo va da 3 a 72 ore dopo la morte. La prima fase post-mortem viene stimata più frequentemente utilizzando la classica triade dei cambiamenti post-mortem: rigor mortis, livor mortis e algor mortis.

Algor Mortis

Algor mortis è il raffreddamento del corpo dopo la morte, principalmente a causa della perdita della regolazione omeostatica da parte dell’ipotalamo, insieme alla perdita di calore nell’ambiente per conduzione, convezione e radiazione. L’algor mortis è il metodo più accurato per stimare il TSD nella prima fase post-mortem. Tuttavia, comporta una procedura complicata e richiede una conoscenza e una ricerca approfondite prima di essere accuratamente utilizzabile sul campo; ciò è dovuto ai numerosi fattori che influenzano il gradiente di temperatura tra la temperatura corporea e la temperatura ambiente, i più inerenti sono le differenze di temperatura di diverse località in diversi momenti del tempo. Una regola pratica afferma che c’è una diminuzione di 1,5 gradi F ogni ora. Sono stati sviluppati diversi grafici, formule e algoritmi per stimare il PMI; Il nomogramma di Henssge è il più insegnato. La stima della TSD utilizzando algor mortis misura le temperature rettali e, sebbene siano state utilizzate in modo coerente, anche i nomogrammi per le temperature cerebrali sono stati sviluppati da Brinkmann et al. nel 1976 e nel 1978 e da Henssge et al. nel 1984.

Rigor Mortis

Il rigore mortis è l’irrigidimento post mortem dei muscoli, causato dall’esaurimento dell’adenosina trifosfato (ATP) dai muscoli, che è necessario per il crollo di filamenti di actina-miosina nelle fibre muscolari. Actina e miosina sono componenti della fibra muscolare e formano un legame covalente durante la contrazione. La cessazione dell’apporto di ossigeno provoca l’interruzione della respirazione aerobica nelle cellule e porta ad una mancanza di produzione di ATP. Il rigor mortis inizia immediatamente dopo la morte e di solito è visto in una sequenza nota come “marcia del rigore” e chiamata anche legge di Nysten. Mentre il rigor mortis si sviluppa simultaneamente in tutti i tessuti muscolari del corpo, volontario e involontario, la dimensione del muscolo determina percettibilità dei cambiamenti da parte dell’esaminatore. I muscoli più piccoli sul viso – intorno agli occhi, intorno alla bocca, ecc. sono i muscoli in cui compare per primo il rigor mortis, seguito dal rigor mortis dei muscoli delle mani e degli arti superiori e infine appare nella grandi muscoli degli arti inferiori Il rigor mortis compare circa 2 ore dopo la morte nei muscoli del viso, progredisce verso gli arti nelle prossime ore, completandosi tra le 6 e le 8 ore dopo la morte.Il rigor mortis rimane quindi per altre 12 ore (fino a 24 ore dopo la morte) e poi inizia a scomparire. Nell’ultima fase del Rigor Mortis, il complesso actina-miosina che si è formato inizia a disintegrarsi a causa della proteolisi, determinando la dissoluzione della rigidità. Questo processo inizia in tutte le cellule contemporaneamente, tuttavia, proprio come con l’aspetto, questo cambiamento è percepibile prima nei muscoli più piccoli del viso, seguiti dai muscoli degli arti superiori e infine i muscoli grandi degli arti inferiori. Il rigor mortis generalmente scompare 36 ore dopo la morte, seguita da una fase nota come flaccidità secondaria.

Livor Mortis

Il cambiamento finale nella triade classica è il livor mortis, che è il violaceo -scolorimento blu della pelle nelle parti dipendenti del corpo, dovuto alla raccolta di sangue nei vasi della pelle, causato dall’attrazione gravitazionale. L’ipostasi si sviluppa come macchie di scolorimento entro mezz’ora a 2 ore, queste macchie poi si fondono per formare chiazze più grandi, che si combinano ulteriormente per formare uno scolorimento uniforme delle parti dipendenti del corpo che non è stato sottoposto a pressione, che appare da 6 a 12 ore. Lo scolorimento diventa “fisso” dopo un certo periodo, a causa della disgregazione dei globuli e della fuoriuscita di emoglobina. Questa fissazione è confermata applicando una pressione con i pollici ed è tradizionalmente utilizzata per denotare una PMI maggiore di 12 ore. Questo metodo di stima del PMI richiedeva un approccio oggettivo e moderno, portando allo sviluppo di metodi colorimetrici per la stima del PMI dal livor mortis.

Analisi istomorfologica

Altri metodi di la stima del TSD nella fase iniziale include l’analisi isto-morfologica e biochimica. La conta ematica totale e differenziale, così come l’esame morfologico microscopico del sangue, è stata descritta come metodo per la stima della TSD. Tutte le cellule del sangue non erano identificabili oltre 84 ore dopo la morte. Allo stesso modo, è stato riscontrato che anche la conta delle cellule del sangue diminuisce oltre 84 ore dopo la morte. Studi istologici della pelle hanno dimostrato che i cambiamenti degenerativi compaiono nella pelle 6 ore dopo la morte e si manifestano per la prima volta come vacuolazione del corpo basale e dello spinoso. La separazione dermo-epidermica è osservata 9 ore dopo la morte, mentre il derma ha mostrato rarefazione e disintegrazione rispettivamente 6 e 18 ore dopo la morte. Il glicogeno nella membrana basale delle ghiandole sudoripare, il citoplasma delle cellule secretorie e le cellule dei dotti si esauriscono entro 3 ore dal PMI e porta a cellule PAS-negative sull’istologia. La membrana basale, tuttavia, continua a mostrare una colorazione magenta fino a 18 ore dopo la mortem. Le ghiandole sudoripare eccrine mostrano vacuolizzazione dopo 3-4 ore di PMI e le cellule sembrano essersi completamente disintegrate 15 ore dopo la morte. Le ghiandole sebacee appaiono normali fino a 18 ore post mortem, visto come una separazione degli strati e la disintegrazione della papilla pilifera. Gli studi hanno anche dimostrato che la pleocitosi può essere utilizzata per stimare il PMI utilizzando un’equazione polinomiale del terzo ordine. Le cellule sono principalmente linfociti con una frazione significativa di macrofagi, che diventano vacuolati e non identificabili dopo 12 ore.

Valutazione biochimica

La valutazione biochimica del sangue non è significativa nell’immediato post mortem fase a causa della mancanza di morte cellulare. D’altra parte, la morte cellulare rende estremamente difficile la valutazione biochimica del sangue nella fase iniziale. Inoltre, vi è la ridistribuzione degli elettroliti dalle cellule nel plasma e nel siero, con conseguenti variazioni variabili nei livelli di questi elettroliti. Queste variazioni e le loro implicazioni sono studiate nel campo emergente della tanatochimica. La valutazione biochimica è stata utile per stimare il PMI da umor vitreo, liquido sinoviale, liquido pericardico, urina e liquido cerebrospinale. Tuttavia, è necessario tenere conto di numerosi fattori quando si esamina il PMI basato sulla biochimica, inclusi, ma non limitati a, età, sesso, background biologico, stile di vita, causa di morte e tutta una serie di altri fattori intrinseci ed estrinseci. È stato riscontrato che solo pochi marcatori biochimici (su 388) hanno avuto un’indagine sufficiente con queste considerazioni – vale a dire potassio, sodio, urea, cloruro, magnesio, ipoxantina e troponina cardiaca T. essere allarmante, con 0 (zero) marcatori biochimici che si ritiene abbiano avuto una ricerca adeguata e adatti all’uso. Sei sono stati trovati per essere adeguatamente ricercati ma non adatti per l’uso pratico. Nel frattempo, 18 sono stati trovati per essere stati studiati male e non adatti per l’applicazione e altri 364 marcatori biochimici non avevano informazioni sufficienti.

Reazioni sovra-vitali

Reazioni sovra-vitali sono stati proposti anche come mezzo di stima del PMI. La determinazione del periodo di sovra-vitalità, quindi, può aiutare nella stima del PMI.Per questo metodo, Madea definisce il PMI in quattro fasi: il periodo di latenza, in cui, nonostante l’interruzione della circolazione, il tessuto continua a eseguire la respirazione aerobica fino all’esaurimento delle sue riserve, il periodo di sopravvivenza, in cui si verifica una perdita della funzione del tessuto, ma possono essere riattivato utilizzando stimoli esterni, ad esempio, la stimolazione elettrica dei nervi – il periodo di rianimazione, in cui la capacità del tessuto di recuperare è completamente persa, – e il periodo sovra-vitale. Madea definisce la sovra-vitalità come il periodo di sopravvivenza del tessuto dopo un’ischemia completa e irreversibile. Questo concetto afferma che il periodo di sopravvivenza comprende il periodo di latenza, il periodo di rianimazione comprende sia il periodo di latenza che il periodo di sopravvivenza e il periodo di sovra-vitalità include tutti gli altri tre. La sovra-vitalità è anche diversa dal periodo di rianimazione in quanto il tessuto è eccitabile indipendentemente dal recupero della funzione. Ad esempio, il periodo di rianimazione del muscolo scheletrico è approssimato da 2 a 3 ore, ma il periodo sopravitale in alcuni casi può estendersi a 20 ore. Allo stesso modo, i muscoli cardiaci hanno un periodo di rianimazione da 3,5 a 4 minuti, mentre il periodo sopravitale può estendersi fino a 2 ore. È stato sviluppato un metodo per stimare il PMI utilizzando l’eccitabilità elettrica di Orbicularis oculi utilizzando elettrodi di superficie. Un rapporto tra tempo di rilassamento e forza massima, chiamato tempo di rilassamento correlato alla forza, è risultato affidabile per la stima del PMI. È anche importante considerare la super-sensibilità del tessuto nell’immediata fase post mortem, chiamata fenomeno di Zsako. La reazione sovra-vitale, quindi, esamina la contrazione idio-muscolare o locale e non la contrazione dell’intero muscolo.

PMI tardiva

La fase post-mortem tardiva è il periodo quando il tessuto corporeo inizia a disintegrarsi ed è principalmente descrivibile come decomposizione o putrefazione, formazione di adipoceri, mummificazione o scheletrizzazione. Il tessuto complesso del corpo inizia a disintegrarsi in forme molecolari più semplici a seguito della disgregazione del tessuto da parte degli enzimi o dei batteri del corpo, nonché dei batteri che colonizzano i resti dopo la morte. Il corpo subisce principalmente decomposizione o putrefazione, con conseguente decolorazione verdastra, gonfiore dovuto alla formazione di gas e necrosi liquefattiva. La decomposizione dei resti dipende dal clima, dalla stagione, dal peso corporeo e dall’abbigliamento. La decomposizione può dividersi in cinque fasi: fresca, decomposizione precoce, decomposizione avanzata, scheletrizzazione e decomposizione estrema.

Fase fresca

La fase fresca può iniziare già 24 ore e non più tardi come 7 giorni dopo la morte, specialmente nei mesi invernali più freddi. Questa fase non mostra alcuna attività da parte degli insetti oltre alla deposizione di uova di mosca soffiata nelle cavità e nelle aree di deiscenza dei tessuti. La deposizione di uova è stata documentata in pazienti vivi, specialmente in soggetti immobili e debilitati.

Fase di decomposizione iniziale

La fase di decomposizione iniziale inizia con l’inizio dello scivolamento della pelle e della caduta dei capelli. Questi cambiamenti di solito iniziano dal primo giorno dopo la morte fino a cinque giorni dopo la morte. Anche i vermi iniziano ad apparire sul corpo, a partire dal secondo giorno post mortem; il corpo appare verde-grigiastro e presenta delle marezzature (alcune parti del corpo possono ancora apparire rosate). La fossa iliaca destra è la prima parte del corpo a mostrare uno scolorimento verdastro e può essere vista già nel secondo giorno post mortem. Ciò è dovuto alla posizione relativamente superficiale del cieco. Le estremità appaiono brunastre con l’essiccazione della pelle, specialmente sulle dita, sul naso e sulle orecchie, di solito a partire dal secondo giorno post mortem; il corpo appare verdastro con distinto gonfiore. Lo scolorimento verdastro, che ha avuto inizio dalla fossa iliaca destra, progredisce fino a comprendere l’intero addome, con concomitante gonfiore dell’addome, che può ricominciare il secondo giorno. Il gonfiore avanza al resto del busto e successivamente al corpo, provocando crepitii su tutto il corpo durante la manipolazione. Questa fase è anche associata allo spurgo – il rilascio del fluido di decomposizione dagli orifizi – e un forte odore sgradevole. Il gonfiore può essere osservato già tre giorni dopo la morte e di solito scompare entro la seconda settimana dopo la morte, a causa della rottura dei gas addominali; Il corpo appare verde-nerastro entro la seconda settimana; e infine, il corpo appare bruno-nero con l’aspetto coriaceo della pelle. Questa fase si osserva solitamente fino alla fine del primo mese, ma può essere prolungata fino a due mesi. Anche il tessuto sottostante appare scurito con la consistenza che cambia in una pasta viscosa e viscida. Tra il decimo giorno e la fine del primo mese, l’attività delle larve continua sotto la pelle coriacea, con la pelle che si secca ulteriormente per formare un guscio coriaceo indurito, con perdita di tessuto molle sottostante.

Fase di decomposizione avanzata

La fase di decomposizione avanzata inizia con la comparsa di cedimenti cutanei allentati e il collasso della cavità addominale. Il corpo mostra anche un’estesa infestazione da larve. Questi cambiamenti di solito compaiono dopo la morte del quarto giorno, ma possono iniziare anche dieci giorni dopo la morte. La perdita di tessuto molle, compresa la perdita della pelle coriacea essiccata, provoca l’esposizione di meno della metà del materiale scheletrico. Questa fase è solitamente associata alla presenza di casi di pupa, nonché alla comparsa di muffe sul corpo e sugli indumenti; questo di solito si verifica nel secondo mese ma può verificarsi da sei a nove mesi dopo la morte. Il disseccamento della pelle esterna potrebbe accompagnare la ritenzione strutturale degli organi interni o essere accompagnato da autolisi e perdita di organi interni. La decomposizione può progredire rapidamente in resti sepolti o in resti lasciati in un ambiente con elevata umidità, con conseguente attività estrema delle larve, autolisi accelerata e potrebbe progredire direttamente alla scheletrizzazione o alla formazione di adipoceri, senza essiccazione e mummificazione della pelle e del tessuto esterno. I resti possono subire sia la saponificazione che l’essiccazione, chiamate rispettivamente formazione di adipoceri e mummificazione, a seconda dell’ambiente e delle condizioni presenti. La presenza di un ambiente caldo e umido privo di ossigeno favorisce lo sviluppo dell’adipocere, una sostanza cerosa che deriva dall’idrolisi batterica anaerobica del grasso corporeo. L’organismo principale responsabile della formazione degli adipoceri è il Clostridium perfringens, che causa aggregazione di cristalli di acidi grassi, con conseguente perdita di dettaglio cellulare oltre che di epidermide. La formazione di adipocere e la durata del tempo dipendono principalmente dal pH, dalla temperatura, dall’umidità e dalla mancanza di ossigeno nell’ambiente.

Fase di scheletrizzazione

La fase di scheletrizzazione si traduce in un’esposizione di più della metà degli elementi scheletrici, che potrebbero ancora mostrare tessuto molle che è ancora attaccato. Tuttavia, la scheletrizzazione è solitamente associata a tessuto essiccato o adipocere su meno della metà del corpo. Il tessuto essiccato compare più comunemente in corrispondenza degli attacchi muscolari o legamentosi lungo la colonna vertebrale e delle estremità delle ossa lunghe. Nel frattempo, l’adipocere è comunemente visto sopra le cosce, con alti depositi di grasso sottocutaneo. Questa fase compare due mesi dopo la morte, sebbene di solito si presenti tra due e nove mesi post mortem. La continuazione della decomposizione porta all’esposizione di tutto il materiale osseo, con solo un po ‘di materiale grasso lasciato o esponendo le ossa secche; questo di solito si osserva dopo sei mesi di esposizione, sebbene sia stato segnalato che si sia verificato già dalla terza settimana. Questa fase può durare anni se gli elementi non sono esposti, come si vede nei resti sepolti o nei resti trovati all’interno.

Fase di decomposizione estrema

La fase di decomposizione estrema si vede solo in resti che sono stati esposti all’ambiente e porta all’erosione degli elementi scheletrici. Questa erosione inizia con il processo di sbiancamento delle ossa ed è comunemente osservata sei mesi dopo l’esposizione, sebbene sia stato documentato che compaia già due mesi dopo la morte e fino a due anni e mezzo dopo la morte. Gli elementi scheletrici subiscono un’ulteriore degenerazione della struttura corticale, con conseguente perdita metafisaria delle ossa lunghe ed esposizione della parte spugnosa delle ossa spugnose; questo si osserva comunemente tra un anno e un anno e mezzo dopo la morte, sebbene sia stato segnalato che si sia verificato già nel quarto mese. È stato riferito che la perdita metafisaria si è verificata al PMI di cinque anni e mezzo.

Entomologia forense

L’analisi entomologica forense è stata una pratica di routine per la stima del PMI all’inizio e periodi post-mortem tardivi. Esistono due metodi di stima che utilizzano l’entomologia forense: basati sulla successione e basati sullo sviluppo. In un approccio basato sulla successione, viene scelto un modello di successione adeguato, che corrisponda alle condizioni ambientali, comprese le circostanze della morte. Pertanto, è necessaria la ricerca forense sull’effetto dei fattori ambientali sulla decomposizione e sulla successione degli insetti. Mañas-Jordá ha dimostrato che diversi taxa sono risultati prevalenti in base alle condizioni ambientali. Sono state esaminate la diversità delle specie e il numero di individui. Non hanno rilevato alcuna associazione di specie con lo stadio I e II di decomposizione, tre specie associate allo stadio III, due specie associate allo stadio IV e una specie associata allo stadio V nella riserva naturale di Huitepec.Nella città di San Cristóbal de las Casas, sono state trovate quattro specie associate allo stadio II, tre specie associate allo stadio III, solo una specie Chrysomyarufifacies (Macquart; Diptera: Calliphoridae) e Fannia sp1 associata allo stadio IV e infine, Stilpon sp1 è stato trovato associato allo Stadio V.

L’approccio basato sullo sviluppo guarda alla presenza di diversi stadi dell’insetto sul corpo e nell’area circostante, per aiutare a stimare PMI. Matuszewski ha utilizzato L. caesar (Diptera: Calliphoridae), Thanatophilus sinuatus e N. littoralis (Coleoptera: Silphidae) nella sua ricerca per dimostrare che la presenza di uno stadio di sviluppo e l’assenza dei successivi stadi di sviluppo degli insetti carogne, potrebbero essere utilizzati in insieme alla stima del loro intervallo di pre-comparsa (PAI) per sviluppare una stima affidabile del PMI. È quindi essenziale stabilire valori PAI noti per diversi insetti nell’ambiente in esame.

Valutazione molecolare

I recenti progressi nella biologia molecolare hanno portato a vari progressi nella stima di PMI. La degenerazione di mRNA, DNA e proteine viene valutata e può essere utilizzata per stimare il PMI. I trascritti di RNA sono risultati i più rilevanti a causa della loro rapida degenerazione e correlazione temporale. Diversi studi hanno dimostrato una correlazione lineare tra PMI e degenerazione. Questa correlazione è risultata essere dipendente dalla temperatura e dal tessuto.

Uno studio di Porto, Portogallo ha esaminato 11 trascritti genici per la correlazione con la TSD. 8 tessuti murini sono stati divisi in tre gruppi in base alla stabilità dell’RNA: il primo gruppo (I) comprendeva campioni di tessuto dal cuore, milza e polmone, il secondo gruppo (II) era costituito da quadricipiti femorali, fegato e stomaco e il terzo gruppo (III) Pancreas e pelle. I campioni dei gruppi I e II sono stati analizzati in serie. L’analisi ha mostrato che la degenerazione dell’RNA era dipendente dal tempo per tutte le 11 ore, sebbene nessuna significatività statistica fosse dimostrabile per le prime quattro ore. I ricercatori hanno selezionato 11 geni per l’analisi PCR quantitativa. Sebbene l’RNA nel cuore sia risultato essere il più stabile, non ha mostrato alcuna correlazione con il PMI. È stato riscontrato che un totale di sei geni sono correlati con il PMI, quattro nel quadricipite femorale (Actb, Gapdh, Ppia e Srp72) e due geni nel fegato (Alb e Cyp2E1). Sono stati sviluppati modelli matematici per stimare il PMI con una media di errore di 51,4 minuti.